- 大鼠多巴胺(DA)elisa試劑盒?開學(xué)季特惠”與中秋團(tuán)圓禮包活動(dòng)火熱進(jìn)行
- 大鼠肌肉成纖維樣細(xì)胞;RM1九月開學(xué)季優(yōu)惠活動(dòng)
- 小鼠Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)elisa試劑盒?“八月中旬優(yōu)惠盛宴”
- 如何使用熒光定量RT-PCR試劑盒進(jìn)行實(shí)驗(yàn)
- 血紅素加氧酶ELIS檢測試劑盒?特惠活動(dòng)
- 羅氏熒光定量試劑盒的儲(chǔ)存條件與操作注意事項(xiàng)
- 豬肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白B(SP-B)elisa試劑盒?的夏季優(yōu)惠活動(dòng)
- 卡他莫拉菌LAMP試劑盒新品上架七月優(yōu)惠
- 大鼠微纖絲相關(guān)糖蛋白3(MFAP3)elisa試劑盒優(yōu)惠
- 接觸蛋白相關(guān)蛋白樣4ELISA檢測試劑盒優(yōu)惠
錯(cuò)配修復(fù)基因超家族屬于管家基因,目前已發(fā)現(xiàn)人類6個(gè)錯(cuò)配修復(fù)基因:hMSH2、hMSH3、hMSH6、hMLH1、hPMS1和hPMS2。錯(cuò)配修復(fù)基因的異常表現(xiàn)為基因突變和蛋白質(zhì)表達(dá)的減步,而蛋白質(zhì)表達(dá)涉及RNA水平和蛋白質(zhì)水平。下面就RNA水平作一簡要闡述。
錯(cuò)配修復(fù)基因mRNA原位雜交:
【材料】
蓋玻片、濕盒、雜交爐、PBS、SSC、預(yù)雜交液、BcIP/NBT。
【操作程序】
1.將細(xì)胞制成1~107/L細(xì)胞懸液,將細(xì)胞懸液一滴接種于已消毒培養(yǎng)皿中的蓋玻片上,加培養(yǎng)基培養(yǎng)48小時(shí)。
2.將細(xì)胞生長狀態(tài)良好的蓋玻片取出0.01mol/L PBS漂洗3次,甲醇:丙酮(1:1)固定液固定10分鐘,PBS漂洗3次。
3.將制好的細(xì)胞片用10mg/ml蛋白酶K消化,37℃,10分鐘,PBS洗2次,每次2分鐘。
4.取200μl預(yù)雜交液95℃變性10分鐘,冰浴中驟冷,加樣于細(xì)胞標(biāo)本上.平放入密封濕盒.42℃孵育3小時(shí)。
5.標(biāo)記探針加于200μl預(yù)雜交液中,95℃變性10分鐘,冰浴中驟冷,加樣于細(xì)胞標(biāo)本上,平放入密封濕盒,42℃恒溫過夜。
6.依次用6 xSSC-45%甲酰胺洗10分鐘,2×SSC洗10分鐘×2次,0.2xSSC洗10分鐘×2次。
7.加堿性磷酸酶標(biāo)記的抗體,37℃,4小時(shí)。
8.洗脫液洗10分鐘,加入BCIP/NBT顯色。鏡檢顯況,PBS沖洗,終止顯色。
上一篇 ELISA試劑盒酶標(biāo)抗體的量 下一篇 細(xì)胞培養(yǎng)基的分類