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用于臨床檢驗(yàn)的肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白CElisa試劑盒主要有以下幾種類型:
1.雙抗體夾心法測(cè)抗原
雙抗體夾心法是檢測(cè)抗原zui常用的方法,操作步驟如下:
1)將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié),形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。
2)加受檢標(biāo)本,保溫反應(yīng)。標(biāo)本中的抗原與固相抗體結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。
3)加酶標(biāo)抗體,保溫反應(yīng)。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān)。1.血清
血清是zui常用于肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白CElisa試劑盒檢測(cè)的一類樣本。
采血過程中應(yīng)避免溶血,因?yàn)榧t細(xì)胞裂解時(shí)會(huì)釋放具有過氧化酶活性的物質(zhì),在以HRP為標(biāo)記的ELISA檢測(cè)中會(huì)有非特異性的顯色,而導(dǎo)致檢測(cè)的不準(zhǔn)確性。同時(shí)也應(yīng)避免細(xì)菌污染,因?yàn)榫w內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP從而導(dǎo)致檢測(cè)的假陽性。
2.血漿
用含抗凝劑的或離心管采集血液標(biāo)本,標(biāo)本采集后30min內(nèi)4℃ 1000×g離心15min,取上清即血漿。將上清分裝多份,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。避免使用溶血或高血脂的標(biāo)本。
3.細(xì)胞培養(yǎng)上清
取細(xì)胞培養(yǎng)上清到離心管,1000×g離心20min,除去細(xì)胞碎片及雜質(zhì),取上清,-20℃或-80℃保存,避免反復(fù)凍融。
4.細(xì)胞裂解液
5.組織勻漿液
6、尿液、唾液等其他液體生物樣本
肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白CElisa試劑盒可用于測(cè)定抗原,也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有三個(gè)必要的試劑:
(1)固相的抗菌素原或抗體,即"免疫吸附劑"(immunosorbent);
(2)酶標(biāo)記的抗原或抗體,稱為"結(jié)合物"(conjugate);
(3)酶反應(yīng)的底物。根據(jù)肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白CElisa試劑盒的來源和標(biāo)本的情況以及檢測(cè)的具體條件,可設(shè)計(jì)出各種不同類型的檢測(cè)方法。