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一、抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒不抗凝收集血清:
1、無(wú)添加劑的干燥空管收集:
血管內(nèi)壁均勻涂有防止掛壁的藥劑(硅油)。它利用血液自然凝固的原理使血液凝固,等血清自然析出后,離心使用。主要用于血清生化(肝功、腎功、心肌酶、等)、電解質(zhì)(血清鉀、鈉、氯、鈣、磷等)、甲狀腺功能、藥物檢測(cè)、艾滋病檢測(cè)、腫瘤標(biāo)志物、血清免疫學(xué)檢測(cè)。
亦可直接用干燥EP管收集全血,充分靜置使得紅細(xì)胞充分自然凝固后,離心分離出血清待用或保存。
2、用促凝管收集:
內(nèi)壁均勻涂有防止掛壁的硅油,同時(shí)添加了促凝劑。促凝劑能激活纖維蛋白酶,使可溶性纖維蛋白變成不可溶性的纖維蛋白聚體,進(jìn)而形成穩(wěn)定的纖維蛋白凝塊,如果想快點(diǎn)出結(jié)果時(shí),可采用促凝管。一般靜置半小時(shí)到1小時(shí),直接離心分離出血清待用或保存,常用于急診生化。
3、含有分離膠及促凝劑的收集:
管壁經(jīng)過(guò)硅化處理,并涂有促凝劑可加速血液的凝固,縮短檢驗(yàn)時(shí)間。管內(nèi)加有分離膠,分離膠與PET管具有很好的親和性,確實(shí)起到隔離作用,一般即使在普通離心機(jī)上,分離膠能將血液中的液體成分(血清)和固體成分(血細(xì)胞)*分開并積聚在試管中形成屏障。離心后血清中不產(chǎn)生油滴,主要用于血清生化(肝功、腎功、心肌酶、等)、電解質(zhì)(血清鉀、鈉、氯、鈣、磷等)、甲狀腺功能、藥物檢測(cè)、艾滋病檢測(cè)、腫瘤標(biāo)志物、血清免疫學(xué)。
用促凝管的優(yōu)點(diǎn):
①、加速紅細(xì)胞的凝固,無(wú)需長(zhǎng)時(shí)間的靜置;
②、帶有分離膠,有效的將血清分離出來(lái),更好的避免溶血;
收集血清的缺點(diǎn):
①、需要紅細(xì)胞的充分凝固,所需靜置時(shí)間較長(zhǎng);
②、分離出的血清相對(duì)較少,1ml全血不抗凝約只能分離出0.2-0.3ml血清。
二、抗凝收集血漿:
收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒可直接離心分離血漿待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
1、肝素抗凝:
zui常用的抗凝劑,一般情況下對(duì)相關(guān)指標(biāo)都不會(huì)有干擾,同時(shí)抗凝比例較大(抗凝劑:
全血=1:30),對(duì)血液基本沒(méi)有稀釋影響。
肝素是一種含有硫酸基團(tuán)的粘多糖,帶有強(qiáng)大的負(fù)電荷,具有加強(qiáng)抗III滅活絲
氨酸蛋白酶的作用,從而阻止的形成,并有阻止血小板聚集等多種抗凝作用。肝素管一般用于生化及血流變的檢測(cè),是電解質(zhì)檢測(cè)的選擇,檢驗(yàn)血標(biāo)本中的鈉離子時(shí),不能使用,以免影響檢測(cè)結(jié)果。也不能用于白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類,因肝素會(huì)引起白細(xì)胞聚集。
盡管用肝素的三種鹽抗凝所得電解質(zhì)濃度無(wú)顯著差別,但肝素鋰還是被認(rèn)為是的。這主要是人們認(rèn)為可使鈉的測(cè)定值偏高,肝素銨可使血氨測(cè)定值偏高(尿素酶法測(cè)定)。
肝素可抑制分子生物學(xué)中常用的一些工具酶,如限制性內(nèi)切酶、Taq酶等,可影響PCR
的實(shí)驗(yàn)結(jié)果??刹捎靡恍┓椒ㄏ嗡氐囊种菩?yīng),如利用肝素酶,或在分離白細(xì)胞后用緩沖液洗滌白細(xì)胞兩次以上等。然而,許多實(shí)驗(yàn)工作者仍不愿意在進(jìn)行分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)時(shí)采用肝素作抗凝劑。
2、EDTA抗凝:
乙二胺四乙酸是一種氨基多羧基酸,可以有效地鰲合血液中的鈣離子,鰲合鈣會(huì)將鈣從
反應(yīng)點(diǎn)移走將阻止和終止內(nèi)源性或外源性凝血過(guò)程,從而防止血液凝固,與其他抗凝劑比較而言,其對(duì)血球的凝集及血細(xì)胞的形態(tài)影響較小,故通常使用EDTA鹽(2K、3K、2Na)作為抗凝劑。用于一般血液學(xué)檢查,不能用于血凝、微量元素及PCR檢查。
由于EDTA會(huì)螯合重金屬離子,用該抗凝劑的話,部分帶有金屬離子的大分子酶都會(huì)有大量損失,具體看客戶測(cè)定的指標(biāo)來(lái)選擇,做血常規(guī)的話必須用EDTA抗凝。
3、枸櫞酸鹽抗凝:
檸檬酸鈉通過(guò)作用于血樣中鈣離子鰲合而起抗凝作用,國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(NCCLS)為3.2%或3.8%,抗凝劑與血比例為1:9,主要用于纖溶系統(tǒng)(原時(shí)間、時(shí)間、活化部分時(shí)間、纖維蛋白原)。采血時(shí)應(yīng)注意采足血量,以保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,采血后應(yīng)立即輕輕顛倒混勻5-8次。由于抗凝比例較?。鼓齽喝?1:9),對(duì)血液有一定的稀釋,一般不建議。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4-0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒血清、血漿收集好后,暫時(shí)不測(cè)定,可立即低溫凍存,溫度越低越好,中間如*凍融,-20℃以下可保存一個(gè)月,-70℃以下可保存三個(gè)月。