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GT-17檢測(cè)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
點(diǎn)擊次數(shù):1027 更新時(shí)間:2018-11-28
GT-17檢測(cè)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)原理
用于免疫酶技術(shù)的酶有很多,如過(guò)氧化物酶,堿性磷酸酯酶,β-D-半乳糖苷酶,葡萄糖氧化酶,碳酸酐酶,乙酰酯酶,6-磷酸葡萄糖脫氧酶等。常用于ELISA法的酶有辣根過(guò)氧化物酶,堿性磷酸酯酶等,其中尤以辣根過(guò)氧化物酶為多。由于酶摧化的是氧化還原反應(yīng),在呈色后須立刻測(cè)定,否則空氣中的氧化作用使顏色加深,無(wú)法準(zhǔn)確地定量。
辣根過(guò)氧化物酶(HRP)是一種糖蛋白,每個(gè)分子含有一個(gè)氯化血紅素(protonhemin)區(qū)作輔基。酶的濃度和純度常以輔基的含量表示。氯化血紅素輔基的zui大吸收峰是403nm,HRP酶蛋白的zui大吸收峰是275nm,所以酶的濃度和純度計(jì)算式是(已知HRP的A(1cm 403nm 1%)=25,式中1%指HRP百分濃度為100ml含酶蛋白1g,即10mg/ml,所以,GT-17檢測(cè)ELISA試劑盒酶濃度以 mg/ml 計(jì)算是HRP的A(1cm 403nm mg/ml=2.5)HRP純度(RZ)=A403nm/A275nm純度RZ(Reinheit Zahl)值越大說(shuō)明酶內(nèi)所含雜質(zhì)越少。高純度HRP的RZ值在3.0左右,zui高可達(dá)3.4。用于ELISA檢測(cè)的HRP的RZ值要求在3.0以上。
GT-17檢測(cè)ELISA試劑盒的基本原理有三條:
(1)抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫學(xué)活性;
?。?)抗原或抗體可通過(guò)共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物,而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;
(3)GT-17檢測(cè)ELISA試劑盒酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定是否有免疫反應(yīng)的存在,而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的,因此,可以按底物顯色的程度顯示試驗(yàn)結(jié)果。
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