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1. 自動(dòng)洗板機(jī):每孔加入洗滌液350μl,注入與吸出間隔60秒。洗板5次。
2. 手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,在潔凈的吸水紙上拍干,每孔加洗滌液350μl,浸泡1-2分鐘,吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體,在厚的吸水紙上拍干。洗板5次。
實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫;試劑或樣品配制時(shí),均需充分混勻,并盡量避免起泡。
1.加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。給酶標(biāo)板覆膜,37℃孵育2小時(shí)。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2.棄去液體,甩干,每個(gè)孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分鐘內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜,37℃溫育1小時(shí)。
3.棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板 3次,每次浸泡1-2分鐘,大約350μl /每孔,甩并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。
干4.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內(nèi)配制)100μl,加上覆膜,37℃溫育1小時(shí)。
5.棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,方法同步驟3。
6.每孔加底物溶液100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據(jù)實(shí)際顯色情況酌情縮短或延長(zhǎng),但不可超過30分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時(shí),即可終止)。
7.每孔加終止液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。
8.立即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度(OD值)。應(yīng)提前打開酶標(biāo)儀電源,預(yù)熱儀器,設(shè)置好檢測(cè)程序。
9.實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束。
alpha Actinin 4-Loading Controlα-輔肌動(dòng)蛋白4(內(nèi)參)抗體
Alkaline Phosphatase堿性磷酸酶抗體
AU1 tagAU1 tag標(biāo)簽抗體
AEBP1脂肪細(xì)胞增強(qiáng)結(jié)合蛋白1
AKT1蛋白激酶B
AKT1蛋白激酶B
ANGL2血管生成素樣蛋白2抗體
Angiopoietin 4血管生成素3/血管生成素4抗體
Annexin I膜粘連蛋白 I抗體
Annexin A2膜粘連蛋白 Ⅱ抗體
ATF1活化轉(zhuǎn)錄因子1抗體
Aquaporin 4 水通道蛋白4抗體
ATF2活化復(fù)制因子2抗體
AMPK beta 1腺苷單磷酸活化蛋白激酶β1抗體
Amylin糖尿病相關(guān)肽/胰島淀粉樣肽抗體
Angiotensin II血管緊張素Ⅱ抗體
AT2R血管緊張素Ⅱ受體1抗體
Angiopoietin-1血管生成素-1抗體
Annexin V膜粘連蛋白5抗體
Annexin V重組膜粘連蛋白5抗體
alpha Adaptin銜接蛋白α-Adaptin抗體
APAF1(CT)凋亡蛋白活性因子-1抗體(C端)
APAF1(NT)凋亡蛋白活性因子-1抗體(N端)
ABCG2三磷酸腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員2抗體
APOE載脂蛋白E抗體
Amyloid Precursor Protein淀粉樣肽前體蛋白抗體
Aquaporin 2水通道蛋白-2抗體
AGT血管緊張素原抗體
Androgen receptor雄激素受體抗體
AVEN細(xì)胞死亡調(diào)節(jié)蛋白抗體(凋亡、半胱胺酸蛋白酶激活抑制劑)
Axin1軸蛋白1抗體