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1、抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒引言
在基因時(shí)代和蛋白質(zhì)時(shí)代,人們迫切需要一種具有高靈敏度和高親和力的生物分子探針,用以進(jìn)行定性和定量檢測(cè)。1996年Tyagi和Kramer首先建立了分子信標(biāo)技術(shù),很快這種技術(shù)就廣泛的應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、分子生物學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)和化學(xué)等諸多領(lǐng)域。分子信標(biāo)技術(shù)具有*的特異性,而且操作簡(jiǎn)便、靈敏度高,特別是它可以進(jìn)行實(shí)時(shí)定量檢測(cè)、甚至可以用于活體分析。在臨床診斷、基因檢測(cè)等領(lǐng)域,分子信標(biāo)也越來(lái)越顯示出它的優(yōu)勢(shì)。近年來(lái),人們對(duì)分子信標(biāo)的結(jié)構(gòu)作了諸多改進(jìn),發(fā)展出很多具有更多特性的新型分子信標(biāo)。隨著分子信標(biāo)的發(fā)展,該技術(shù)也必將在更多領(lǐng)域中發(fā)揮出它的優(yōu)勢(shì)。
2 分子信標(biāo)的原理
分子信標(biāo)是一種熒光標(biāo)記的寡核苷酸鏈,一般含有25~35個(gè)核苷酸。在結(jié)構(gòu)上,抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒分子信標(biāo)大體上可以分為三部分:(1)、環(huán)狀區(qū):一般由15~30個(gè)核苷酸組成,可以與靶分子特異結(jié)合;(2)、莖干區(qū):一般由5~8個(gè)堿基對(duì)組成,在分子信標(biāo)與靶分子結(jié)合過(guò)程中可發(fā)生可逆性解離。(3)、熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán):熒光基團(tuán)一般連接在5ˊ端;淬滅基團(tuán)一般連接在3ˊ端,常用4-(4-二甲基氨基偶氮苯基)苯甲酸(DABCYL)作為淬滅基團(tuán)。根據(jù)Foerster理論,中心熒光能量轉(zhuǎn)移效率與兩者距離的6次方成反比。所以只有熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)之間達(dá)到一定的距離時(shí)才會(huì)產(chǎn)生熒光。
自由狀態(tài)時(shí),分子信標(biāo)呈發(fā)卡式結(jié)構(gòu),從而熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)相距較近(約7~10nm)。此時(shí)發(fā)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移,使熒光基團(tuán)發(fā)出的熒光被淬滅基團(tuán)吸收并以熱的形式散發(fā),熒光幾乎*被淬滅,熒光本底極低。當(dāng)分子信標(biāo)與靶分子結(jié)合時(shí),熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)之間的距離加大,從而,分子信標(biāo)的熒光幾乎恢復(fù)。而且所檢測(cè)到的熒光強(qiáng)度與溶液中靶標(biāo)量成正比。
分子信標(biāo)的原理、應(yīng)用及其研究進(jìn)展
3、影響分子信標(biāo)的主要因素
分子信標(biāo)中,熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)之間的距離是影響分子信標(biāo)的zui主要因素。根據(jù)Foerster理論,熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)之間的距離直接影響熒光的強(qiáng)度。
另外,溫度也是影響分子信標(biāo)的一個(gè)重要因素。在較低溫度下,分子信標(biāo)才可以保持發(fā)卡結(jié)構(gòu)。在較高溫度下,分子信標(biāo)將無(wú)法保持其發(fā)卡結(jié)構(gòu),甚至使其伸展為隨機(jī)線狀,造成熒光基團(tuán)和淬滅基團(tuán)分離,從而發(fā)出熒光,出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。有文獻(xiàn)表明,其熔鏈溫度取決于莖干區(qū)的長(zhǎng)度、G-C含量和緩沖液的離子強(qiáng)度。
Bonnet等研究溫度對(duì)分子信標(biāo)影響時(shí)發(fā)現(xiàn),體系的熒光強(qiáng)度呈現(xiàn)為一個(gè)先減弱后增強(qiáng)的過(guò)程。就此,Bonnet等做出如下解釋?zhuān)?br />分子信標(biāo)的原理、應(yīng)用及其研究進(jìn)展
在較低溫度下,分子信標(biāo)與靶標(biāo)結(jié)合呈S1狀態(tài),發(fā)出熒光。隨著溫度升高,分子信標(biāo)與靶標(biāo)分離,分子信標(biāo)重新恢復(fù)為發(fā)卡式結(jié)構(gòu)即S2狀態(tài),從而熒光強(qiáng)度減弱。溫度持續(xù)增高,將導(dǎo)致分子信標(biāo)熔鏈即S3狀態(tài),熒光基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離,導(dǎo)致熒光恢復(fù)。
環(huán)境pH值也是影響分子信標(biāo)的一個(gè)因素。pH值過(guò)高,分子信標(biāo)的發(fā)卡結(jié)構(gòu)可能被破壞,出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。此外,抗Ⅲ抗體Elisa試劑盒分子信標(biāo)的純度,也將對(duì)分子信標(biāo)產(chǎn)生影響。
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