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通常在GSK Elisa Kit板孔中加入包被液后,在4-8℃冰箱中放置過(guò)夜,37℃中保溫2小時(shí)被認(rèn)為具有同等的包被效果。包被的zui適當(dāng)濃度隨載體和包被物的性質(zhì)可有很大的變化,每批材料需通過(guò)實(shí)驗(yàn)與酶結(jié)合物的濃度協(xié)調(diào)選定。一般蛋白質(zhì)的包被濃度為100ng/ml-20ug/ml。
封閉是否必要,取決于ELISA的模式及具體的實(shí)驗(yàn)條件。并非所有的ELISA固相均需封閉,封閉不當(dāng)反而會(huì)使陰性本底增高。一般說(shuō)來(lái),雙抗體夾心法,只要酶標(biāo)記物是高活性的,操作時(shí)洗滌*,不經(jīng)封閉也可得到滿意的結(jié)果。特別是用單抗腹水直接包被時(shí),因其中大量非抗體蛋白在包被時(shí)同樣也吸附在固相表面,業(yè)已起到了類似封閉劑的作用。但在間接法測(cè)定中,封閉一般是不可少的(見(jiàn)2.2.2)。包被好的ELISA板干燥后放入密封袋或錫袋中,在低溫可保存數(shù)月。
封閉(blocking)是繼包被之后用高濃度的無(wú)關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過(guò)程??乖蚩贵w包被時(shí)所用的濃度較低,吸收后固相載體表面尚有未被占據(jù)的空隙,封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙,從而排斥在ELISA試劑盒其后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。封閉的手續(xù)與包被相類似。zui常用的封閉劑是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白,也有用10%的小牛血清或1%明膠作為封閉劑的。脫脂奶粉也是一種良好的封閉劑,GSK Elisa Kit其zui大的特點(diǎn)是價(jià)廉,可以高濃度使用(5%)。高質(zhì)量的速溶食用低脂奶粉即可直接當(dāng)作封閉劑使用,但由于奶粉的成份復(fù)雜,而且封閉后的載體不易保存,因此在試劑盒的制備中較少應(yīng)用。
151006-14-3 普伐他汀1,1,3,3-四甲基氨基丁烷標(biāo)準(zhǔn)品 200mg
1508-76-5 Procyclidine Hydrochloride 鹽酸丙環(huán)定標(biāo)準(zhǔn)品 200mg
1508-75-4 Tropicamide 標(biāo)準(zhǔn)品 200mg
1508-65-2 Oxybutynin Chloride 氯化奧昔布寧標(biāo)準(zhǔn)品 200mg
150399-21-6 Balsalazide Disodium 標(biāo)準(zhǔn)品 200mg
150-13-0 Aminobenzoic Acid 氨苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品 200mg
149845-06-7 Saquinavir Mesylate 甲磺酸沙奎拉韋標(biāo)準(zhǔn)品 200mg
149-32-6 Erythritol 赤蘚糖醇標(biāo)準(zhǔn)品 200mg
148408-66-6 Docetaxel 三水多烯標(biāo)準(zhǔn)品 200mg
GSK Elisa Kit
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