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實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

中耳位于外耳和內(nèi)耳之間，主要結(jié)構(gòu)是鼓膜和聽(tīng)骨鏈。中耳內(nèi)部不規(guī)則中空的結(jié)構(gòu)表面覆蓋著一層上皮組織，起到物理保護(hù)的作用。

細(xì)胞特性：

1）細(xì)胞來(lái)源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常中耳組織。

2)細(xì)胞鑒定：廣譜角蛋白((Pan Cytokeratin)熒光染色為陽(yáng)性。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細(xì)胞生長(zhǎng)方式：上皮樣細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 DELF 原代上皮細(xì)胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活因子1α(PPARγC1α)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： PPARγC1α ELISA Kit

Rat 6 keto prostaglandin F1a (6-keto-PGF1a) ELISA Kit 大鼠6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)檢測(cè)試劑盒

RatAi-glucoprotein210,GP210ELISAKit 大鼠抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforeNOSELISAKit大鼠內(nèi)皮型合成酶

細(xì)胞氯乙酰基轉(zhuǎn)移酶(CAT)報(bào)告基因活性同位素薄層色譜(TLC)檢測(cè)試劑盒20次

RatLeptospiraIgG,LepIgGELISAKit大鼠鉤端IgG(LepIgG)檢測(cè)試劑盒

HA重組甲型流感 H11N9 (A/mallard/Alberta/294/1977) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin 0.1mgShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Dap22) ?？窠?jīng)毒素(35肽)

S100A9重組人 S100A9 / CAGB / P14 蛋白 Protein

AMTN Protein Human 重組人 AMTN / Amelotin 蛋白

LXN Protein Human 重組人 Latexin / LXN / TCI 蛋白

ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin 0.1mgShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Dap22) ?？窠?jīng)毒素(35肽)

AMTN Protein Human 重組人 AMTN / Amelotin 蛋白

HA重組甲型流感 H11N9 (A/mallard/Alberta/294/1977) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

LXN Protein Human 重組人 Latexin / LXN / TCI 蛋白

S100A9重組人 S100A9 / CAGB / P14 蛋白 Protein

豬肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)ELISA 試劑盒

Human a disiegrin and metalloproteinase 8 (ADAM8) ELISA Kit 人解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)檢測(cè)試劑盒

Porcineniicoxide,NOELISAKit 豬血清(NO)檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAlpha2-PI(HumanAlpha2-plasmininhititor)ELISAKit人α2纖溶酶抑制物

血液酪酶(tyrosinase)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

NudeMouseClaracellprotein,CC16ELISAKit裸鼠克拉拉細(xì)胞蛋白(CC16)檢測(cè)試劑盒

兔中耳上皮細(xì)胞豬白介素2(IL-2)檢測(cè)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)檢測(cè)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬白介素1β(IL-1β)檢測(cè)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬白介素1α(IL-1α)檢測(cè)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。