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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

股骨頭（ caput femoris）呈圓形，約占一圓球的2/3，其上為關(guān)節(jié)軟骨所覆蓋，在其頂部微后有一小窩，稱為股骨頭凹，為股骨頭韌帶附著處，股骨頭可由此獲得少量血供。

細(xì)胞特性：

1）組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的股骨頭動(dòng)脈組織。

2)細(xì)胞鑒定：血管假性血友病因子（vWF）熒光染色為陽(yáng)性。

3)經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5）細(xì)胞生長(zhǎng)方式：鋪路石狀細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 DELF 原代 內(nèi)皮 細(xì) 胞培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠肝配蛋白B受體3(EPHB3)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： EPHB3 ELISA Kit

Rat alpha L fucosidase (AFU) ELISA Kit 大鼠αL巖藻糖苷酶(AFU)檢測(cè)試劑盒

RatClusterofdiffereiation30,CD30ELISAKit 大鼠白細(xì)胞分化抗原30(CD30)檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforE2ELISAKIT魚雌二醇

細(xì)胞培養(yǎng)污染性支原體M.hominis鑒定16SrDNAPCR擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒20次

Ratinducibleniicoxidesyhase,iNOSELISAKit大鼠誘導(dǎo)型合成酶(iNOS)檢測(cè)試劑盒

IL13重組小鼠 IL13 / ALRH 蛋白 Protein

轉(zhuǎn)乙?；?span>(DLAT)重組蛋白 Recombinant Dihydrolipoyl Transacetylase (DLAT)

NRN1L重組人 NRN1L / neuritin 1-like / Cpg15-2 蛋白  Protein

ALDH1A3 Protein Human 重組人 ALDH1A3 / RALDH3 蛋白 (His 標(biāo)簽)

CD38 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 SCARB3 蛋白

肌肌酸激酶(CKM)天然蛋白 Native Creatine Kinase, Muscle (CKM)

ALDH1A3 Protein Human 重組人 ALDH1A3 / RALDH3 蛋白 (His 標(biāo)簽)

PDGFC重組小鼠 PDGF-C / SCDGF 蛋白  Protein

TEK Protein Rat 重組大鼠 Tie2 / TEK 蛋白

SLITRK6重組人 SLITRK6 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

豬補(bǔ)體片段3b受體(C3bR)ELISA 試劑盒

Human Legionella aibody IgM (LP Ab-IgM) ELISA Kit 人軍團(tuán)菌抗體IgM(LP Ab-IgM )檢測(cè)試劑盒

PorcineGlucoseanspoer2,GL2ELISAKit 豬葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2(GL2)檢測(cè)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforALK(Humananapasticlymphomakinase)ELISAKit人間變性淋巴瘤激酶

血液卵0脂乙酰轉(zhuǎn)移酶(LCAT)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒20次

MousevonWillebrandFactor,vWFELISAKit小鼠血管性血友病因子/瑞斯托輔因子(vWF)檢測(cè)試劑盒

兔股骨頭微血管內(nèi)皮細(xì)胞中文名稱   方法   規(guī)格

小鼠多巴胺(DA)ELISAKit   ELISA. 

小鼠高靈敏度促甲狀腺激素(U-TSH)ELISAKit   ELISA. 

小鼠高敏甲狀腺素(u-T4)ELISAKit   ELISA.