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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

肌腱細(xì)胞是肌腱組織的基本功能單位，主要合成和分泌膠原蛋白、彈性蛋白和糖蛋白基質(zhì)，維持肌腱組織的新陳代謝。

肌腱損傷后的方式包括內(nèi)源性和外源性，而理想的方式是控制外源性，促進(jìn)內(nèi)源性。內(nèi)源性的機(jī)制是肌腱細(xì)胞通過細(xì)胞自身的增殖從而促進(jìn)肌腱，但目前肌腱細(xì)胞在體外經(jīng)過多次傳代培養(yǎng)后會(huì)喪失分裂增殖能力。

目前已知多種因素影響肌腱過程，其中與肌腱關(guān)系密切的有著重要調(diào)控作用的細(xì)胞因子主要有：堿性成纖維生長(zhǎng)因子，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 β，骨形態(tài)發(fā)生蛋白-12，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，胰島素樣生長(zhǎng)因子-1，血小板源性生長(zhǎng)因子等。

細(xì)胞特性：

1） 組織來源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的肌腱組織。

2) 細(xì)胞鑒定：Ⅰ型膠原熒光染色為陽(yáng)性。

3) 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5) 細(xì)胞生長(zhǎng)方式：梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。

推薦培養(yǎng)基：

我們推薦使用 Delf 原代肌腱 細(xì)胞 培養(yǎng)體系 作為體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠B細(xì)胞κ輕肽基因增強(qiáng)子核因子抑制因子α(NFKBIA)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： NFKBIA ELISA Kit

Mouse glamic acid decarboxylase aoaibody (GAD-Ab) ELISA Kit 小鼠谷脫羧酶自身抗體(GAD-Ab)檢測(cè)試劑盒

MouseNeuroglobin,NGBELISAKit 小鼠腦紅蛋白(NGB)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumaissuefactor,IFELISAKit人組織因子

通用型血液凝集分子纖維蛋白檢測(cè)法(Fibrometer)分析試劑盒50次

ELISAKitLDH大鼠乳酸脫氫酶

CD28重組小鼠 CD28 蛋白 Protein

ADH/AVP peptide 抗利尿激素/血管升壓素抗原(和肽素 1mgADH/AVP peptide 抗利尿激素/血管升壓素抗原(和肽素)

ENTPD2重組人 NTPDase 2 / ENTPD2 蛋白 (aa 29-460, His 標(biāo)簽) Protein

FCGR2A Protein Human 重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 His, His & AVI 標(biāo)簽), Biotinylated

TNFSF9 Protein Rat 重組大鼠 4-1BBL / CD137L / TNFSF9 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

ADH/AVP peptide 抗利尿激素/血管升壓素抗原(和肽素 1mgADH/AVP peptide 抗利尿激素/血管升壓素抗原(和肽素)

FCGR2A Protein Human 重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (167 His, His & AVI 標(biāo)簽), Biotinylated

CD28重組小鼠 CD28 蛋白 Protein

TNFSF9 Protein Rat 重組大鼠 4-1BBL / CD137L / TNFSF9 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

ENTPD2重組人 NTPDase 2 / ENTPD2 蛋白 (aa 29-460, His 標(biāo)簽) Protein

小鼠肝脂酶(HL)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human eosinophil chemotactic factor (ECF) ELISA Kit 人鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化因子(ECF)檢測(cè)試劑盒

Humanferritin,FEELISAKit 人鐵蛋白(FE)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanAi-tissueanGSlaminaseIgA,tTG-IgA檢測(cè)試劑盒人抗組織轉(zhuǎn)酶抗體IgA(tTG-IgA)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物氧化型(GSSG)濃度高效液相色譜定量檢測(cè)試劑盒50次

HumanansformingGrowthfactorβ1，TGF-β1ELISAKit人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠肌腱細(xì)胞小鼠6--前列腺素F1a(mouse 6-k-PGF1a)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠前列腺素E2(mouse PGE2)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠0脂酶A2(mouse sPLA2)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝

小鼠Pleioophin（mouse Pleioophin）   作用：   ELISA   規(guī)格：      進(jìn)口分裝