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大鼠 8-羥基脫氧鳥苷（8-OHdG）DRGelisa試劑盒 Rat 8-hydroxy-2-deoxyguanosine，8-OHdG ELISA Kit
8-OHdG DRGelisa試劑盒費(fèi)用【實(shí)驗(yàn)用途】8-OHdG, 8-羥基脫氧鳥苷（8-hydroxy-2-deoxyguanosine，8-OHdG）,8-OHdG是DNA氧化損傷的特異產(chǎn)物，是*的內(nèi)源性及外源性因素對(duì)DNA氧化損傷的生物標(biāo)志物。8-OHdG是DNA氧化損傷的主要產(chǎn)物之一。在復(fù)制過程中，DNA鏈上8-OHdG可以與C以外的其它堿基配對(duì)形成點(diǎn)突變，其中GC→TA突變的發(fā)生已為大量研究所證實(shí)，并被認(rèn)為是氧化應(yīng)激因素致癌、致突變的主要機(jī)理之一。機(jī)體修復(fù)機(jī)制正常時(shí)，8-OHdG可以在hOGG1等酶的作用下從DNA鏈上切除并重新?lián)饺胝５膲A基，而切下的8-OHdG則可入血經(jīng)尿液排出體外。8-OHdG在體內(nèi)穩(wěn)定存在，一旦形成不再被機(jī)體進(jìn)一步代謝，尿中8-OHdG含量與細(xì)胞內(nèi)DNA氧化損傷程度相關(guān)。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒（ELISA）。預(yù)先包被的抗體為多克隆抗體。檢測(cè)相抗體也為多克隆抗體，經(jīng)（biotin）標(biāo)記。樣品和標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng)；經(jīng)過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測(cè)因子呈正相關(guān)。

試劑盒組成及試劑配制 ：
1.8-OHdG DRGelisa試劑盒費(fèi)用 酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔）。 
2. 標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：2瓶（凍干品）。
3. 樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶
4. 標(biāo)記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6. 標(biāo)記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。 
9. 濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。 
10. 終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
操作流程：
（1）8-OHdG DRGelisa試劑盒費(fèi)用待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。

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大鼠肝細(xì)胞，BRL-3A細(xì)胞 1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶 細(xì)胞系
大鼠肝星形細(xì)胞，CFSC-8B細(xì)胞 1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶 細(xì)胞系
大鼠回腸細(xì)胞，IEC-18細(xì)胞 1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶 細(xì)胞系
大鼠腦I型星形膠質(zhì)細(xì)胞，CTX-TNA細(xì)胞 1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶 細(xì)胞系
大鼠腦間質(zhì)細(xì)胞，DI TNC1細(xì)胞 1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶 細(xì)胞系
大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞，C6細(xì)胞 1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶 細(xì)胞系
大鼠腦星形膠質(zhì)細(xì)胞，CTX細(xì)胞 1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶 細(xì)胞系
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大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞 高分化，PC12高分化細(xì)胞 1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶 細(xì)胞系
大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞 未分化，PC12未分化細(xì)胞 1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶 細(xì)胞系
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大鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞，IEC-6細(xì)胞 1 x 10^6 cells/T25培養(yǎng)瓶 細(xì)胞系
服務(wù)承諾：
一、8-OHdG DRGelisa試劑盒費(fèi)用質(zhì)量保證,有問題免費(fèi)包換；
二、提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)（為客戶提供來樣檢測(cè)服務(wù),zui大限度實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性）；
三、提供全程技術(shù)指導(dǎo)。