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Annexin A5 DRGelisa試劑盒說明書服務(wù)承諾：
一、質(zhì)量保證,有問題免費(fèi)包換；
二、提供免費(fèi)代測服務(wù)（為客戶提供來樣檢測服務(wù),zui大限度實驗結(jié)果的有效性）；
三、提供全程技術(shù)指導(dǎo)。

大鼠膜聯(lián)蛋白A5（Annexin A5）DRGelisa試劑盒 Rat Annexin A5 ELISA Kit
Annexin A5 DRGelisa試劑盒說明書【實驗用途】Annexin A5(膜聯(lián)蛋白A5), 膜聯(lián)蛋白A5是一個Ca~(2+)依賴的磷脂結(jié)合蛋白家族,從上世紀(jì)70年代末發(fā)現(xiàn)*個膜聯(lián)蛋白至今,在脊椎類生物中已發(fā)現(xiàn)了12個家族成員。它們在結(jié)構(gòu)上都具有高度保守的C末端。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒（ELISA）。預(yù)先包被的抗體為多克隆抗體。檢測相抗體也為多克隆抗體，經(jīng)（biotin）標(biāo)記。樣品和標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng)；經(jīng)過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關(guān)。
試劑盒組成及試劑配制 ：
1.Annexin A5 DRGelisa試劑盒說明書 酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔）。 
2. 標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：2瓶（凍干品）。
3. 樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶
4. 標(biāo)記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6. 標(biāo)記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7. 辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8. 底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。 
9. 濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。 
10. 終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
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操作流程：
（1）Annexin A5 DRGelisa試劑盒說明書待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔；設(shè)兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個空白對照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
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