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使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線（以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR（見下步），每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

參數(shù)規(guī)格：

儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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檢測步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)，每個測試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請勿選擇ROX參比熒光。

2--5-甲吡分子式：118.14英文名稱：2- cyano -5- methyl pyridine：1620-77-5分子量： C7H6N2

S-2-芐氮雜環(huán)丙烷分子式：133.19英文名稱：S-2- benzyl nitrogen heterocyclic propane：73058-30-7分子量： C9H11N

3-酰甲溴分子式：英文名稱：3- cyano phenacyl bromide：50916-55-7分子量：

五味子甲素英文名稱：A vegetarian分子式：416.50728分子量：C24H32O6：61281-38-7

燦爛甲酚蘭英文名稱：Brilliant cresyl blue分子式：分子量：：

落新婦苷英文名稱：Astilbin分子式：450.39分子量：C21H22O11：29838-67-3

1,3,5-三硫酚分子式：174.29英文名稱：1,3,5- - three aminothiophenol：38004-59-0分子量： C6H6S3

2,5-二三氟甲分子式：176.14英文名稱：2,5- two amino three fluorine toluene：364-13-6分子量： C7H7F3N2

酰分子式：258.34英文名稱：Bio - Hydrazine：66640-86-6分子量： C10H18N4O2S

人皰疹病毒7型LAMP試劑盒小鼠 PDCD1LG2 基因全長ORF克隆

小鼠 IL12A & IL12B Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 IL5Ra 轉(zhuǎn)錄變體1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽

重組人 CXCL12 / SDF-1 蛋白 (isoform a, His 標(biāo)簽)

小鼠 CD109 基因全長ORF克隆

人 CSNK2A2 基因全長ORF克隆

大鼠 KIM1 / TIM1 / HAVCR1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 TAZ 基因全長ORF克隆

人 DR6 / TNFRSF21 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 NT5E 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽

人 CD3E & CD3G Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

pCMV / hygro (C端His標(biāo)簽) 陽性對照載體