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產(chǎn)品名稱:產(chǎn)氣克雷伯氏菌LAMP試劑盒
產(chǎn)品特點:產(chǎn)氣克雷伯氏菌LAMP試劑盒上海一研生物相關(guān)產(chǎn)品:雙(二異丙)(2-乙氧)膦英稱:Double (two isopropyl amino (2-) - ethoxy) phosphine分子式:301.411分子量: C15H32N3OPC號:102691-36-1四氯二砜分子式:356.05英文名稱:Four CL two:116-29-0分子量: C12H6Cl4O2S
產(chǎn)品型號:50次
更新日期:2021-02-20
訪問次數(shù):384
50次產(chǎn)氣克雷伯氏菌LAMP試劑盒的詳細資料:
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標準曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標準曲線。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)氣克雷伯氏菌LAMP試劑盒 |
英文名稱 | Lamp kit for Klebsiella aerogenes |
規(guī)格 | 50次 |
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
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檢測步驟:
一、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
(1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時收集熒光信號。報告基團:設(shè)置為FAM。淬滅基團:NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
2-溴-5-氟吡分子式:175.99英文名稱:2- bromide -5-:41404-58-4分子量: C5H3BrFN
2,2,4,5,5-五甲-3-咪唑啉-3-氧物分子式:156.23英文名稱:2,2,4,5,5- five -3- methyl imidazoline -3- oxide:64934-83-4分子量: C8H16N2O
異戊英文名稱:ISO e分子式:70.13分子量: C5H10:513-35-9
英文名稱:Of the分子式:298.42分子量: C20H26O2:68-22-4
雙(二異丙)(2-乙氧)膦英文名稱:Double (two isopropyl amino (2-) - ethoxy) phosphine分子式:301.411分子量: C15H32N3OP:102691-36-1
四氯二砜分子式:356.05英文名稱:Four CL two:116-29-0分子量: C12H6Cl4O2S
嘧分子式:80.09英文名稱:Pyrimidine:289-95-2分子量: C4H4N2
二氫吡分子式:253.29英文名稱:Two hydrogen pyridine:1149-23-1分子量: C13H19NO4
5-氯-2-三氟甲分子式:306.45英文名稱:5- -2- three f:23399-77-1分子量: C7H3ClF3I
產(chǎn)氣克雷伯氏菌LAMP試劑盒重組小鼠 Gremlin 1 / GREM1 蛋白 (His 標簽)
甲型流感 H5N9 (A/chicken/Italy/22A/1998) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 Cripto / TDGF1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 Alkaline Phosphatase / ALPI 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
大鼠 GP1BA 基因全長ORF克隆
人 IL1R9 / IL1RAPL2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽
小鼠 FOLR2 基因全長ORF克隆
人 Angiogenin 基因全長ORF克隆
人 SGK196 基因全長ORF克隆
人 CDO1 基因全長ORF克隆
大鼠 IFNGR / IFNGR1 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
食蟹猴 ACVRL1 基因全長ORF克隆
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