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產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱：CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit

產(chǎn)品中文名稱：CFDA SE 細胞增殖與示蹤檢測試劑盒

規(guī)格：200T×5/200T×10

貨號：EY-01X8526
用途：僅供科研研究實驗

特點&優(yōu)勢:

•  CFDA SE探針可以在幾代中很好地保留在活細胞中。

•  探針會轉(zhuǎn)移到子細胞，但不轉(zhuǎn)移到群體中的相鄰細胞。

•  兼容流式細胞儀或熒光顯微鏡等檢測方法

• 實驗開始前，確保所有的組分及設(shè)備處于合適的溫度。

保存建議:收到貨后，請避光保存于-20℃。請參閱說明書中各個組件的存儲條件，自發(fā)貨之日起，按照推薦的保存條件，有效期為12個月。

運輸條件:藍冰運輸

背景

5(6)-CFDA, SE 是一種可對活細胞進行熒光標記的細胞示蹤染料，不僅可用于細胞增殖的體外實驗，還可用于追蹤細胞在體內(nèi)的分裂增殖過程。5(6)-CFDA, SE 是二乙酸熒光素（Fluorescein diacetate，FDA）的衍生物，具有細胞膜滲透性，本身不具有熒光發(fā)光性。當(dāng)通過被動運輸穿透細胞膜進入活細胞后，被胞漿內(nèi)的酯酶催化生成羧基熒光素琥珀酰亞胺（carboxyfluoresceinsuccinimidyl ester，CFSE），可發(fā)強烈的綠色熒光，不能穿透細胞膜，能完好的保留在胞內(nèi)。CFSE 還可自發(fā)并不可逆地與細胞內(nèi)的氨基結(jié)合從而偶聯(lián)到細胞蛋白質(zhì)上，同時過量且未被偶聯(lián)的 5(6)-CFDA, SE 通過被動擴散回到細胞外培養(yǎng)基內(nèi)，被后續(xù)清洗步驟所清除。經(jīng) 5(6)-CFDA, SE 標記的非分裂細胞的熒光非常穩(wěn)定，穩(wěn)定標記的時間可達數(shù)月，因此非常適用于細胞群落分析。5(6)-CFDA, SE 標記細胞的熒光非常均一，優(yōu)于以前使用的其他細胞示蹤熒光探針如 PKH26，并且分裂后的子代細胞的熒光分配也很均一。在細胞分裂增殖過程中，CFSE 標記熒光可平均分配至兩個子代細胞中，熒光強度變?yōu)橛H代細胞的一半，通過流式細胞儀（FL1 通道）根據(jù)熒光強度的不同，可檢測出未分裂細胞，分裂一次（1/2 的熒光強度），二次（1/4 的熒光強度），三次（1/8 的熒光強度），以及更多分裂次數(shù)的細胞。5(6)-CFDA, SE 可檢測分裂次數(shù)多達八次甚至更多。

本產(chǎn)品具有下列特點:

 1.操作簡便、快捷?？芍苯蛹尤氲綑z測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟。

2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機溶劑來溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進一步生成。
公司正在出售的產(chǎn)品：

1α(MEP1α)重組蛋白 Recombinant Meprin A Alpha (MEP1a)

CDC37 Protein Human 重組人 CDC37 / CDC37A 蛋白 (GST 標簽)

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Rabbitalpha-granularmembraneprotein,GMP-140ELISAKit 兔血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforApo-H(HumanApolipoproteinH)ELISAKit人載脂蛋白H

溴脫氧尿核苷(BrdU)溶液(100毫摩爾)1毫升

Porcinemyelinbasicprotein,MBPELISAKit豬髓0脂堿性蛋白(MBP)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

CFDA SE 細胞增殖與示蹤檢測試劑盒CCL2重組小鼠 CCL2 / MCP-1 / MCP1 蛋白 Protein

1α(MEP1α)重組蛋白 Recombinant Meprin A Alpha (MEP1a)

RIOK1重組人 RIOK1 / RIO kinase 1 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

CDC37 Protein Human 重組人 CDC37 / CDC37A 蛋白 (GST 標簽)

IgG Protein Rabbit 重組兔 IgG-Fc 蛋白 (185 Thr/Ala, Asn 284/Ser)

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達載體

1、載體酶切:將表達質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達質(zhì)粒的表達菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標志(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達宿主菌的感受態(tài)細胞。

(四)誘導(dǎo)表達

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。