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產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱：Rat IFN-γ protein

產(chǎn)品中文名稱：重組大鼠干擾素-γ（IFN-γ）

規(guī)格：20 μg/500 μg/100 μg/1 mg

貨號：EY-01X8647
用途：僅供科研研究實驗

特點&優(yōu)勢:

分子:IFN-γ

標(biāo)簽:無標(biāo)簽

表達宿主:大腸桿菌

種屬:大鼠

序列:氨基酸序列來源于： 大鼠 IFN-γ (P01581)(Glu23-Cys156) 表達的蛋白片段。

蛋白長度：重組大鼠IFN-γ由134個氨基酸組成，預(yù)測分子量為14.8 kDa。 在還原條件下，在SDS-PAGE中大鼠IFN-γ蛋白的表觀分子量約為14.8 kDa。

純度:≥ 95 % ，使用SDS-PAGE檢測

采用 LAL 法檢測，每 1 μg 蛋白質(zhì)中的 EU 含量小于 1.0。

產(chǎn)品形式:凍干粉，凍干緩沖液為無菌的 150m動?動

背景

IFN-γ，也稱為IFNG，屬于I I型干擾素家族的一種分泌的蛋白質(zhì)。 IFN-γ主要由自然殺傷性T細胞（NK）產(chǎn)生。NK細胞作為天然免疫應(yīng)答的組成部分，一旦抗原特異性免疫產(chǎn)生，CD4和CD8細胞毒性T淋巴細胞效應(yīng)就會產(chǎn)生。 IFN-γ具有抗病毒，免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤特性。 IFNG除具有抗病毒活性:外，還具有重要的免疫調(diào)節(jié)功能，它是巨噬細胞的有效活化因子，對轉(zhuǎn)移的腫瘤細胞具有抗增殖作用，并且可以增強I型干擾素的抗病毒和抗腫瘤作用。IFN-γ單體包含一個有六個α螺旋的核心和一個在C端區(qū)域延伸的未折疊序列:組成。 IFN-γ對于抵抗病毒和細胞內(nèi)細菌感染的先天性和獲得性免疫應(yīng)答以及控制腫瘤至關(guān)重要。 IFN-γ的異常表達與許多自身炎癥和自身免疫疾病有關(guān)。 IFN-γ在免疫系統(tǒng)中的重要性部分源于其直接抑制病毒復(fù)制的能力，重要的是源于其免疫刺激和免疫調(diào)節(jié)作用。

本產(chǎn)品具有下列特點:

 1.操作簡便、快捷。可直接加入到檢測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細胞,免去溶解步驟。

2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機溶劑來溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進一步生成。

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達載體

1、載體酶切:將表達質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達質(zhì)粒的表達菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達宿主菌的感受態(tài)細胞。

(四)誘導(dǎo)表達

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。

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