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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠卵巢顆粒分離自卵巢組織；卵巢是雌性動(dòng)物的生殖器官，卵巢的功能是產(chǎn)生卵以及類固醇激素。卵巢的位置與睪丸相同，僅左側(cè)發(fā)育（右側(cè)已退化），呈葡萄狀，均為處于不同發(fā)育時(shí)期的卵泡，卵泡呈黃色，卵巢表面密布血管。卵巢的大小與年齡和產(chǎn)卵期有關(guān)。大多數(shù)脊椎動(dòng)物有兩個(gè)卵巢，但是部分魚類的兩個(gè)卵巢融合為單個(gè)結(jié)構(gòu)，而所有鳥類只有左側(cè)卵巢有機(jī)能。卵巢是位于子宮兩側(cè)的一對(duì)卵圓形的生殖器官，它的外表有一層上皮組織，其下方有薄層的結(jié)締組織。卵巢的內(nèi)部結(jié)構(gòu)可分為皮質(zhì)和髓質(zhì)。皮質(zhì)位于卵巢的周圍部分，主要由卵泡和結(jié)締組織構(gòu)成；髓質(zhì)位于中央，由疏松結(jié)締組織構(gòu)成，其中有許多血管、淋巴管和神經(jīng)。卵巢顆粒細(xì)胞是卵巢的主要功能細(xì)胞，其增殖與分化直接影響著卵泡的生長(zhǎng)啟動(dòng)、發(fā)育、排卵、黃體形成以及甾體激素分泌等卵巢功能活動(dòng)。卵巢顆粒細(xì)胞是卵泡內(nèi)的大細(xì)胞群，也是主要的功能細(xì)胞，卵泡發(fā)育的顯著標(biāo)志之一就是顆粒細(xì)胞迅速生長(zhǎng)及增殖，而成年動(dòng)物的卵泡閉鎖主要是由顆粒細(xì)胞凋亡引起，尤其在卵泡發(fā)育后期，此外，顆粒細(xì)胞還與卵泡膜細(xì)胞共同完成卵巢激素的合成，維持著有利于卵母細(xì)胞生長(zhǎng)和成熟的微環(huán)境。細(xì)胞形狀呈圓形或橢圓形。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠卵巢顆粒采用先機(jī)械分離，而后膠原酶消化，后差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠卵巢顆粒經(jīng)FSHR免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

山羊β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

內(nèi)皮型合成酶(eNOS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

豚鼠腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)試劑盒 ，英文名： BDNF ELISA Kit

Human paraneoplastic pemphigus aibody (PNP) ELISA Kit 人副性天皰瘡抗體(PNP)試劑盒

rabbitImmunoglobulinE,IgEELISAKit 兔子免疫球蛋白E(IgE)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforBALPELISAKit大鼠骨堿性0酸酶

線蟲β-半乳糖苷酶原位染色試劑盒50次

Rabbitcholesterolesteransferprotein,CETPELISAKit兔子酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)試劑盒規(guī)格：96T/48T

IL1RAPL1重組人 IL-1R8 / IL1RAPL1 蛋白 Protein

抑制素βE(INHβE)重組蛋白 Recombinant Inhibin Beta E (INHbE)

HA重組甲型流感 H10N3 (A/duck/Hong Kong/786/1979) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

IL17RA Protein Human 重組人 IL17RA / CD217 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

GFP Protein Aequorea victoria 重組水母 GFP 蛋白

抑制素βE(INHβE)重組蛋白 Recombinant Inhibin Beta E (INHbE)

IL17RA Protein Human 重組人 IL17RA / CD217 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

IL1RAPL1重組人 IL-1R8 / IL1RAPL1 蛋白 Protein

GFP Protein Aequorea victoria 重組水母 GFP 蛋白

HA重組甲型流感 H10N3 (A/duck/Hong Kong/786/1979) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein

大鼠卵巢顆粒細(xì)胞豚鼠腫瘤壞死因子α(TNFα)試劑盒 ，英文名： TNFα ELISA Kit

Lung resistance protein (LRP) ELISA Kit 人肺耐藥蛋白(LRP)試劑盒

rabbitmaixmetalloproteinase5,MMP-5ELISAKit 兔子基質(zhì)金屬蛋白酶5(MMP-5)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforBCR(HumanBcellreceptor)ELISAKit人B細(xì)胞受體

仙客來(lái)培養(yǎng)基500毫升溶液/片劑

rabbitC-ReactiveProtein,CRPELISAKit兔子C反應(yīng)蛋白(CRP)試劑盒規(guī)格：96T/48T

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。