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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

大鼠胚胎肝母分離自胚胎肝組織；肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個器官，并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用；肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁。肝臟是機體內(nèi)臟里最大的器官，位于機體中的腹部位置，在右側(cè)橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方。肝臟是機體消化系統(tǒng)中最大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。肝臟起源于腹側(cè)前腸內(nèi)胚層細胞（一種多潛能干細胞）。在 ED8.5 的小鼠和 ED9.5 的大鼠，前腸的原始上皮細胞接觸心肌中胚層后快速增殖，形成肝原基。大約1d后，原始上皮細胞侵入原始橫膈，繼續(xù)分化為幼稚肝臟上皮細胞，這些細胞先表達 AFP 然后是ALb。幼稚肝臟上皮細胞很快成熟，并進一步分化為肝細胞或膽管上皮細胞，因為此期的肝臟上皮細胞其具有向這兩種肝實質(zhì)細胞雙向分化的潛能，所以又稱肝母細胞。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠胚胎肝母采用膠原酶消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的大鼠胚胎肝母經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 上皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠谷酰胺(Gln)檢測試劑盒 ，英文名： Gln ELISA Kit

Porcine ierferon alpha (IFN- alpha) ELISA Kit 豬α干擾素(IFN-α)檢測試劑盒

出血性大腸桿菌(EHEC)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMIP-1Alpha/CCL3(HumanMacrophageInflammatoryProtein-1Alpha)ELISAkit人巨噬細胞性蛋白1α

體液科薩基病毒B(CoxsackievirusB)定性檢測試劑盒20次

ELISAKit2,3-DPG犬2,3-二0酸甘油酸

IFNGR2重組小鼠 IFNGR2 蛋白 Protein

ABCD-1/CCL22 嗜酸粒細胞趨化蛋白22抗原 0.2mgABCD-1/CCL22 嗜酸粒細胞趨化蛋白22抗原

BPIFA2重組人 BPIFA2 / C20orf70 蛋白 (Fc 標簽) Protein

CD19 Protein Human 重組人 CD19 / Leu-12 蛋白

TIMP1 Protein Rat 重組大鼠 TIMP-1 / TIMP1 蛋白

ABCD-1/CCL22 嗜酸粒細胞趨化蛋白22抗原 0.2mgABCD-1/CCL22 嗜酸粒細胞趨化蛋白22抗原

CD19 Protein Human 重組人 CD19 / Leu-12 蛋白

IFNGR2重組小鼠 IFNGR2 蛋白 Protein

TIMP1 Protein Rat 重組大鼠 TIMP-1 / TIMP1 蛋白

BPIFA2重組人 BPIFA2 / C20orf70 蛋白 (Fc 標簽) Protein

小鼠胰島素樣生長因子2(IGF-2)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat monocyte chemotactic protein 4 (MCP-4/CCL13) ELISA Kit 大鼠單核細胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)檢測試劑盒

HumanGasicMucin,GMELISAKit 人胃粘液素(GM)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor2,3-DPG(Human2,3-Disphosphoglycerate,2)ELISAKit人2,3-二0酸甘油酸

飲料環(huán)(cyclamate)含量薄層色譜法定性檢測試劑盒20次

Mouselipoproteinα,Lp-αELISAKit小鼠脂蛋白α(Lp-α)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

大鼠胚胎肝母細胞小鼠組織因子途徑抑制物(TFPI)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠水通道蛋白5(AQP-5)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠水通道蛋白4(AQP-4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠水通道蛋白3(AQP-3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T