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實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠脾臟單核分離自脾臟組織；脾臟是機(jī)體大的免疫器官，占全身淋巴組織總量的25%，含有大量的淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，是機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫的中心。位于左季肋區(qū)后外方肋弓深處，與9－11肋相對(duì)，長(zhǎng)軸與第10肋一致。膈面與膈肌和左肋膈竇相鄰，前方有胃，后方與左腎、左腎上腺毗鄰，下端與結(jié)腸脾溝相鄰，地柔軟的網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞器官。單核細(xì)胞（monocytes）是體積大的白細(xì)胞。其細(xì)胞核常偏位，呈多形性，如卵圓形、腎形(a)、馬蹄形(b)、不規(guī)則形（c）等，常有折疊感(c)；染色質(zhì)呈疏松網(wǎng)狀，著色較淺。胞質(zhì)較多，嗜堿性，但因含大量細(xì)小的嗜天青顆粒而染成灰藍(lán)色，顆粒含過(guò)氧化物酶。單核細(xì)胞是血液中大的血細(xì)胞。目前認(rèn)為它是巨噬細(xì)胞的前身，具有明顯的變形運(yùn)動(dòng)，能吞噬、清除受傷、衰老的細(xì)胞及其碎片。單核細(xì)胞還參與免疫反應(yīng)，在吞噬抗原后將所攜帶的抗原決定簇轉(zhuǎn)交給淋巴細(xì)胞，誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞的特異性免性反應(yīng)。單核細(xì)胞也是對(duì)付細(xì)胞內(nèi)致病細(xì)菌和寄生蟲(chóng)的主要細(xì)胞防衛(wèi)系統(tǒng)，還具有識(shí)別和殺傷腫瘤細(xì)胞的能力。淋巴細(xì)胞則為具有特異性免疫功能的細(xì)胞。T淋巴細(xì)胞主要參與細(xì)胞免疫反應(yīng)而B淋巴細(xì)胞參與體液免疫反應(yīng)。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠脾臟單核采用密度梯度離心法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠脾臟單核經(jīng)CD14免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、M-CSF、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：半貼壁半懸浮

細(xì)胞形態(tài)：巨噬細(xì)胞樣

傳代特性：不傳代，不增殖，存活1-2周

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

大鼠脾臟單核體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠白介素18(IL-18)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人(TM)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人Ⅶ(FⅦ)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人可溶性白細(xì)胞抗原G(sHLA-G)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠活化蛋白C(APC)ELISA 試劑盒 96T/48T

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humanfreechorionicgonadoopin,f-βhCGELISAKIT 人游離β絨毛膜(f-βhCG)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanai-Monocyteaibody,AMA試劑盒人抗單核細(xì)胞抗體(AMA)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物葡萄糖6-0酸異構(gòu)酶(glucose-6-phosphateisomerase;GPI)電泳分析試劑盒5次

Humanurokinase，UKELISAKit人(UK)試劑盒規(guī)格：96T/48T

IL11RA重組狗 IL11RA / IL-11RA / IL11Rα 蛋白 Protein

NOS-2 peptide 合成酶-2多肽抗原 0.5mgNOS-2 peptide 合成酶-2多肽抗原

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ERBB3 Protein Human 重組人 HER3 / ErbB3 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

SELE Protein Mouse 重組小鼠 E-Selectin / CD62e / SELE 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

NOS-2 peptide 合成酶-2多肽抗原 0.5mgNOS-2 peptide 合成酶-2多肽抗原

ERBB3 Protein Human 重組人 HER3 / ErbB3 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

IL11RA重組狗 IL11RA / IL-11RA / IL11Rα 蛋白 Protein

SELE Protein Mouse 重組小鼠 E-Selectin / CD62e / SELE 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

CSNK2A1重組人 CSNK2A1 / CK2A1 蛋白 (GST 標(biāo)簽) Protein

大鼠脾臟單核細(xì)胞大鼠白介素6(IL-6)試劑盒 ，英文名： IL-6 ELISA Kit

Mouse ierleukin 1 alpha (IL-1 alpha) ELISA Kit 小鼠白介素1α(IL-1α)試劑盒

ELISA 小鼠熱休克蛋白60(mouse Hsp-60)  進(jìn)口分裝

CLIAKitforINS(HumanInsulin)ELISAKit人胰島素

通用型副氏菌A(SalmonellaParatyphiA)定量PCR擴(kuò)增試劑盒20次

ELISAKitApo-H大鼠載脂蛋白H