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實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

雞脂肪干分離自脂肪組織；脂肪組織主要由大量群集的脂肪細(xì)胞構(gòu)成，聚集成 團(tuán) 的脂肪細(xì)胞由薄層疏松結(jié)締組織分隔成小葉；貯存的脂肪，在需要時(shí)可迅速分解成甘油和 脂肪酸，經(jīng)血液輸送到各組織以供利用。它們影響胰島素敏感性、血壓水平、內(nèi)皮功能 、 纖溶活動(dòng)及炎癥反應(yīng)，參與多種重要病理生理過(guò)程；脂肪組織已由過(guò)去單純作為能量?jī)?chǔ)存 的器官而成為一個(gè)極其重要的內(nèi)分泌系統(tǒng)。脂肪干細(xì)胞(ADSCs)是一種具有多向分化潛能 的干細(xì)胞，主要恢復(fù)組織細(xì)胞的修復(fù)功能，促進(jìn)細(xì)胞的再生，恢復(fù)年輕面容的同時(shí)，身體 機(jī)能也得到充分改善，有效改善亞健康、早衰等疾病，由內(nèi)而外真正的有效抵抗衰老。脂 肪干細(xì)胞具有很多優(yōu)點(diǎn)：①具有自我更新及多向分化的潛能；②來(lái)源充足；③對(duì)供區(qū)的創(chuàng) 傷較??；④獲得率及體外擴(kuò)增速率高。脂肪干細(xì)胞是目前被廣泛應(yīng)用于組織工程領(lǐng)域中理 想的種子細(xì)胞。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的雞脂肪干采用膠原酶消化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的雞脂肪干經(jīng)CD90免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不 含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含FBS、EGF、bFGF、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

雞脂肪干體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶(hù)自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶(hù)用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠白介素26(IL-26)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： IL-26 ELISA Kit

Mouse leukoiene C4 (LTC4) ELISA Kit 小鼠白三烯C4(LTC4)檢測(cè)試劑盒

ELISA 小鼠IgG(mouse IgG)  進(jìn)口分裝

CLIAKitforIL-9ELISAKit大鼠白介素9

通用型果膠生物酶比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

ELISAKitAChRab大鼠乙酰受體抗體

IL17A重組絨猴 IL17 / IL17A 蛋白 Protein

Nociceptin 孤菲肽(痛敏肽 0.2mgNociceptin 孤菲肽(痛敏肽)(抗原)

CSNK2A2重組人 CSNK2A2 / CK2A2 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

EMC8 Protein Human 重組人 EMC8 / COX4NB / NOC4 蛋白

SELP Protein Mouse 重組小鼠 SELP / selectin P / P-selectin 蛋白

Nociceptin 孤菲肽(痛敏肽 0.2mgNociceptin 孤菲肽(痛敏肽)(抗原)

EMC8 Protein Human 重組人 EMC8 / COX4NB / NOC4 蛋白

IL17A重組絨猴 IL17 / IL17A 蛋白 Protein

SELP Protein Mouse 重組小鼠 SELP / selectin P / P-selectin 蛋白

CSNK2A2重組人 CSNK2A2 / CK2A2 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

小鼠堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子9(bFGF-9)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human bactericidal peptide (cecropin) ELISA Kit 人殺菌肽(cecropin)檢測(cè)試劑盒

HumancecropinELISAKit 人殺菌肽(cecropin)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanai-EndomysialAibodyIgA,EMAIgA檢測(cè)試劑盒人抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMAIgA)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物甲基化組蛋白H3-K9染色質(zhì)免疫沉淀分析(CHIP)試劑盒10次

Humanvoltage-gatedcalciumchannel,VGCCELISAKit人鈣離子通道抗體(VGCC)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

雞脂肪干細(xì)胞小鼠促卵泡素(FSH)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠促甲狀腺素釋放激素(H)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠促甲狀腺素(TSH)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠促黃體激素(LH)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝