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細(xì)胞簡介：

人骨髓樹突狀分離自骨髓；骨髓是機(jī)體的造血組織，位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細(xì)胞、血小板和各種白細(xì)胞。血小板有止血作用，白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體，包括細(xì)菌、病毒等；某些淋巴細(xì)胞能制造抗體。因此，骨髓不但是造血器官，它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中，是一種海綿狀的組織，能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色，稱為紅骨髓。出生時，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡增大，脂肪細(xì)胞增多，相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代，后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓DC細(xì)胞是由骨髓單核細(xì)胞誘導(dǎo)而成的；樹突狀細(xì)胞分為成熟樹突狀細(xì)胞和未成熟樹突狀細(xì)胞，典型的未成熟樹突狀細(xì)胞呈半貼壁生長，在GM-CSF、IL4的作用下形成葡萄串樣集落，細(xì)胞大而形態(tài)不規(guī)則，表面皺褶多，亦可見少量短刺狀突，胞內(nèi)細(xì)胞器豐富并可見吞噬泡，具有較強(qiáng)的遷移能力，伴隨有部分未誘導(dǎo)成的單核細(xì)胞，貼壁形態(tài)多樣。而成熟的樹突狀細(xì)胞由未成熟DC進(jìn)一步經(jīng)TNFα、LPS等誘導(dǎo)而成，多數(shù)呈懸浮生長， 細(xì)胞呈圓形，細(xì)胞體積進(jìn)一步增大，表面大量粗細(xì)不等的樹枝樣突起(高倍鏡或者電鏡下可觀察到 )，伴隨少量貼壁未成熟細(xì)胞或者單核細(xì)胞。未成熟DC細(xì)胞長時間培養(yǎng)也可能導(dǎo)致自發(fā)分化成熟。DC細(xì)胞尚無特異性細(xì)胞表面分子標(biāo)志，主要通過形態(tài)學(xué)、組合性細(xì)胞表面標(biāo)志、在混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)中能激活初始T細(xì)胞等特征進(jìn)行鑒定。其中成熟樹突狀細(xì)胞表面高表達(dá)主要組織相容性復(fù)合物(MHC)以及CD80、CD86等共刺激分子，進(jìn)而激活T淋巴細(xì)胞，誘導(dǎo)免疫應(yīng)答，處于啟動、調(diào)控、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié)；未成熟樹突狀細(xì)胞具有很強(qiáng)的抗原攝取加工能力，但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細(xì)胞活化、增殖產(chǎn)生免疫應(yīng)答，不能激活T細(xì)胞的信號，可導(dǎo)致T細(xì)胞無能，從而誘導(dǎo)免疫低反應(yīng)或抗原免疫特異性耐受。未成熟樹突狀細(xì)胞表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達(dá)較低，一般在30%以下。

方法簡介：

實驗室分離的人骨髓未成熟DC采用密度梯度離心法分離骨髓單個核細(xì)胞、培養(yǎng)過程添加細(xì)胞因子誘導(dǎo)而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的人骨髓樹突狀(未成熟DC細(xì)胞)經(jīng)CD86免疫熒光鑒定、細(xì) 胞 形態(tài)等綜合鑒定，純度可達(dá)80%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：半貼壁半懸浮

細(xì)胞形態(tài)：圓形、梭形、多角形，形態(tài)多樣

傳代特性：屬于高度分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

人骨髓樹突狀(未成熟DC細(xì)胞)體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

豬紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA 試劑盒

One pit protein Caveolin1 (Cav-1) ELISA Kit 人窖蛋白Caveolin1(Cav-1)檢測試劑盒

Porcinemyelinbasicprotein,MBPELISAKit 豬髓0脂堿性蛋白(MBP)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAlpha-GST(HumanAlpha-glathioneS-ansferases)ELISAKit人αS轉(zhuǎn)移酶

血液結(jié)構(gòu)型神經(jīng)元合成酶(cNOS/NOS1/nNOS)活性比色法定量檢測試劑盒20次

Plagrowthhormone,GHELISAKit植物生長激素(GH)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

IFNA14重組小鼠 IFNA14 / Interferon alpha-14 蛋白 Protein

環(huán)腺苷二0酸核糖水解酶(cADPRH)重組蛋白 Recombinant Cyclic ADP Ribose Hydrolase (cADPRH)

DCUN1D1重組人 DCUN1D1 / SCCRO 蛋白 Protein

CES2 Protein Human 重組人 CES2 / Carboxylesterase-2 蛋白

IL18R1 Protein Canine 重組狗 IL18R1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

環(huán)腺苷二0酸核糖水解酶(cADPRH)重組蛋白 Recombinant Cyclic ADP Ribose Hydrolase (cADPRH)

CES2 Protein Human 重組人 CES2 / Carboxylesterase-2 蛋白

IFNA14重組小鼠 IFNA14 / Interferon alpha-14 蛋白 Protein

IL18R1 Protein Canine 重組狗 IL18R1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

DCUN1D1重組人 DCUN1D1 / SCCRO 蛋白 Protein

小鼠脫氫表雄酮(DHEA)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human heparan sulfate proteoglycan (HSPG) ELISA Kit 人肝素糖蛋白(HSPG)檢測試劑盒

Humansupperaigen,SagELISAKit 人超抗原(Sag)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

ChickenPlateletFactor4,PF-4檢測試劑盒雞血小板因子4(PF-4/CXCL4)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細(xì)胞PAR-2蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

MouseFMS-liketyrosinekinase3,Flt3ELISAKit小鼠FMS樣酪激酶3(Flt3)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

人骨髓樹突狀細(xì)胞(未成熟DC細(xì)胞)小鼠脫氧酚檢測試劑盒   小鼠脫氧酚試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠脫氧酚試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠脫氧酚試劑盒、小鼠脫氧酚eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠粘蛋白檢測試劑盒   小鼠粘蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠粘蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠粘蛋白試劑盒、小鼠粘蛋白eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠β葡糖苷酶檢測試劑盒   小鼠β葡糖苷酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠β葡糖苷酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠β葡糖苷酶試劑盒、小鼠β葡糖苷酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

小鼠β葡萄糖酸苷酶檢測試劑盒   小鼠β葡萄糖酸苷酶試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠β葡萄糖酸苷酶試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠β葡萄糖酸苷酶試劑盒、小鼠β葡萄糖酸苷酶eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

注意事項：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。