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細胞簡介：

人關節(jié)韌帶成纖維分離自關節(jié)韌帶組織；韌帶是纖維結締組織，將各個骨頭在關節(jié)處連接起來，并在關節(jié)活動時加固關節(jié)穩(wěn)定關節(jié)。其中顳下頜關節(jié)、踝關 節(jié)、膝關節(jié)韌帶組織研究較多，顳下頜關節(jié)兩側(cè)各有三條，即顳下頜韌帶、莖突下頜韌帶和蝶下頜韌帶。踝關節(jié)周圍韌帶根據(jù)其解剖位置可以分成3組，外側(cè)韌帶 ，內(nèi)側(cè)三角韌帶，脛腓聯(lián)合韌帶。膝關節(jié)的韌帶有囊外韌帶和囊內(nèi)韌帶,其共同作用為加強關節(jié)的穩(wěn)定性。囊外韌帶主要有:髕韌帶位于髕骨的下部，關節(jié)囊的前 方,是股四頭肌肌腱的延續(xù),向下附著于脛骨粗隆，兩側(cè)有側(cè)副韌帶加強；囊內(nèi)韌帶:主要為交叉韌帶:前交叉韌帶附著于脛骨髁間隆起前份和股骨外側(cè)髁的內(nèi)側(cè)面 ，防止脛骨過度前移;后交叉韌帶附著于脛骨髁間隆起后份與股骨內(nèi)側(cè)髁的外側(cè)面，防止脛骨過度后移。另外，在膝關節(jié)內(nèi)尚有膝橫韌帶。任何關節(jié)韌帶均可由于 外傷而發(fā)生損傷，但影響較大又較常見的是膝關節(jié)韌帶損傷和踝關節(jié)韌帶損傷。膝關節(jié)韌帶損傷，常見者為膝關節(jié)側(cè)副韌帶損傷。多因膝關節(jié)微屈時，突然受到 內(nèi)翻或外翻的沖擊力所致。踝關節(jié)韌帶損傷。多因行走或跑跳時誤入不平之處所致。以外側(cè)損傷多見。韌帶是致密纖維結締組織，主要特點是細胞、基質(zhì)成分少 ，纖維非常多、纖維粗大排列緊密，且排列方向與承受張力的方向一致，有很強的保護和支持作用。韌帶主要包含韌帶成纖維細胞。人關節(jié)韌帶成纖維對研究關節(jié)韌帶損傷有重要意義。

方法簡介：

實驗室分離的人關節(jié)韌帶成纖維采用 - 膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的人關節(jié)韌帶成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：基礎培養(yǎng)基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

人關節(jié)韌帶成纖維體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠脫氫表雄酮酯(DHEA-S)ELISA 試劑盒

One Japanese encephalitis aibody IgG (JE IgG) ELISA Kit 人流行性乙型腦抗體IgG(JE IgG)檢測試劑盒

HumanBcellreceptor,BCRELISAKit 人B細胞受體(BCR)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

ChickenNuclearfactor-kappaB,NF-κB檢測試劑盒雞核因子κB(NF-κB)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細胞P38蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

mousefollicle-stimulatinghormone,FSHELISAKit小鼠促卵泡素(FSH)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

PRLR重組小鼠 PRLR / Prolactin Receptor 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

BMP4(bone morphogenetic protein 4 0.5mgBMP4(bone morphogenetic protein 4) 骨形態(tài)發(fā)生蛋白4(抗原)

KIT重組人 KIT / c-KIT / CD117 蛋白 (aa 540-972, His & GST 標簽) Protein

CFD Protein Human 重組人 Adipsin / Complement Factor D / CFD 蛋白

CSF2RB Protein Rat 重組大鼠 CD131 / CSF2RB / IL3RB / IL5RB 蛋白 (Fc 標簽)

BMP4(bone morphogenetic protein 4 0.5mgBMP4(bone morphogenetic protein 4) 骨形態(tài)發(fā)生蛋白4(抗原)

CFD Protein Human 重組人 Adipsin / Complement Factor D / CFD 蛋白

PRLR重組小鼠 PRLR / Prolactin Receptor 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

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小鼠褪黑素(MT/MLT)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human keratan sulfate (KS) ELISA Kit 人角質(zhì)素(KS)檢測試劑盒

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ChickensecretoryimmunoglobulinA,SIgA檢測試劑盒雞分泌型免疫球蛋白A(SIgA)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細胞PARP蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

MouseFibronectin,FNELISAKit小鼠纖連蛋白(FN)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

人關節(jié)韌帶成纖維細胞小鼠脫酶(ID)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠褪黑素(MT/MLT)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠透明質(zhì)酸結合蛋白(HABP)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠透明質(zhì)酸(HA)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。