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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：人視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞

英文名稱：Human Retinal Muller Cells

組織來源：視網(wǎng)膜組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

人視網(wǎng)膜Muller分離自視網(wǎng)膜組織；視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層，是一層透明的薄膜。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺層組成，兩層間在病理情況下可分開，稱為視網(wǎng)膜脫離。色素上皮層與脈絡(luò)膜緊密相連，由色素上皮細(xì)胞組成，它們具有支持和營(yíng)養(yǎng)光感受器細(xì)胞、遮光、散熱以及再生和修復(fù)等作用。組織學(xué)上視網(wǎng)膜分為10層，由外向內(nèi)分別為：色素上皮層、視錐、視桿細(xì)胞層、外界膜、外顆粒層、外叢狀層、內(nèi)顆粒層、內(nèi)叢狀層、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層、神經(jīng)纖維層、內(nèi)界膜。視網(wǎng)膜內(nèi)層為襯于血管膜內(nèi)面的一層薄膜，有感光作用；后部鼻側(cè)有一視神經(jīng)乳頭。視網(wǎng)膜上的感覺層是由三個(gè)神經(jīng)元組成。神經(jīng)元是視細(xì)胞層，專司感光，它包括錐細(xì)胞和桿細(xì)胞。視桿細(xì)胞主要在離中心凹較遠(yuǎn)的視網(wǎng)膜上，而視錐細(xì)胞則在中心凹處多。層叫雙節(jié)細(xì)胞，約有10到數(shù)百個(gè)視細(xì)胞通過雙節(jié)細(xì)胞與一個(gè)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞相聯(lián)系，負(fù)責(zé)聯(lián)絡(luò)作用。第三層叫節(jié)細(xì)胞層，專管傳導(dǎo)。視網(wǎng)膜是一層菲薄的但又非常復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，它貼于眼球的后壁部，傳遞來自視網(wǎng)膜感受器沖動(dòng)的神經(jīng)纖維跨越視網(wǎng)膜表面，經(jīng)由視神經(jīng)到達(dá)出口。視網(wǎng)膜的分辨力是不均勻的，在黃斑區(qū)，其分辨能力強(qiáng)。視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞作為視網(wǎng)膜中的主要膠質(zhì)細(xì)胞，大約占視網(wǎng)膜膠質(zhì)細(xì)胞的90%，因而在視網(wǎng)膜疾病中起著何種作用也受到越來越多的關(guān)注。在超微結(jié)構(gòu)水平上，Muller細(xì)胞的胞質(zhì)似乎比臨近的其他細(xì)胞更高的電子密度，更發(fā)達(dá)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，細(xì)胞核是典型的卵圓形或多角形。但在不同物種中或同一物種中的不同部位，Muller細(xì)胞形態(tài)也會(huì)有所差異的。視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞是一種特化的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，不僅具有維持視網(wǎng)膜的正常結(jié)構(gòu)和功能的作用，并調(diào)制視網(wǎng)膜神經(jīng)元活動(dòng)，還能參與多種病理過程，尤其是眼底增殖性病變，如增生性玻璃體視網(wǎng)膜病變、增生性糖尿病視網(wǎng)膜病變等，體外培養(yǎng)Muller細(xì)胞是研究這些增殖性病變途徑之一。

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人視網(wǎng)膜Muller采用膠原酶消化法和反復(fù)消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人視網(wǎng)膜Muller經(jīng)GFAP免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細(xì)胞解離出來。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。

小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1   英文名稱：   Ttansforming Growth Factor -β1   規(guī)格：      英文縮寫：   TGF-β1

小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β2   英文名稱：   Ttansforming Growth Factor -β2   規(guī)格：      英文縮寫：   TGF-β2

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1   英文名稱：   Tissue inhibitors of metalloproteinases 1   規(guī)格：      英文縮寫：   TIMP-1

小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-2   英文名稱：   Tissue inhibitors of metalloproteinases 2   規(guī)格：      英文縮寫：   TIMP-2

小鼠氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human soluble adhesion molecule (Sam) ELISA Kit 人可溶性粘附分子(Sam)試劑盒

Humancadherln-relatedneuronalreceptor1,C-1ELISAKit 人鈣粘蛋白相關(guān)的神經(jīng)受體1(C-1)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitfor1,3-DPG(Human1,3-Disphosphoglycerate,ELISAKit人1,3-二0酸甘油酸

飲料比色法定量試劑盒20次

MouseKidneyinjurymolecule1,Kim-1ELISAKit小鼠腎損傷分子1(Kim-1)試劑盒規(guī)格：96T/48T

CD22重組小鼠 Siglec-2 / CD22 蛋白 Protein

4(KLK4)重組蛋白 Recombinant Kallikrein 4 (KLK4)

AGA重組人 AGA / ASRG / Aspartylglucosaminidase 蛋白 Protein

CD24 Protein Human 重組人 CD24 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

RBP4 Protein Canine 重組狗 RBP4 蛋白

4(KLK4)重組蛋白 Recombinant Kallikrein 4 (KLK4)

CD24 Protein Human 重組人 CD24 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

CD22重組小鼠 Siglec-2 / CD22 蛋白 Protein

RBP4 Protein Canine 重組狗 RBP4 蛋白

AGA重組人 AGA / ASRG / Aspartylglucosaminidase 蛋白 Protein

人視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞大鼠釋放激素受體(GHR)試劑盒 ，英文名： GHR ELISA Kit

Porcine histamine (HIS) ELISA Kit 豬組胺(HIS)試劑盒

ELISA 小鼠腦衍化神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(mouse BDNF)  進(jìn)口分裝

CLIAKitforL-LDH(HumanL-LactateDehydrogenase)ELISAKit人L-乳酸脫氫酶

通用型EBV(EPSTEIN-BARR)病毒定量PCR擴(kuò)增試劑盒20次

ELISAKitCRP雞C反應(yīng)蛋白

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。本公司的所有產(chǎn)品僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)科研等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用