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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人胰腺癌組織源星狀分離自患有胰腺癌病人的胰腺癌組織；胰腺癌是一種惡性程 度很高，診斷和治療都很困難的消化道惡性腫瘤，約90%為起源于腺管上皮的導(dǎo)管腺癌。其發(fā)病率和死亡率近年來(lái)明顯上升。5年生存率<1%，是預(yù)后差的惡性腫瘤之一。胰腺癌早期的確診率不高，手術(shù)死亡率較高，而很低。胰腺癌 的病因尚不十分清楚。其發(fā)生與吸煙、飲酒、高脂肪和高蛋白飲食、過(guò)量飲用咖啡、環(huán)境污染及遺傳因素有關(guān)；近年來(lái)的調(diào)查報(bào)告發(fā)現(xiàn)糖尿病人群中胰腺癌的發(fā) 病率明顯高于普通人群；也有人注意到慢性胰腺炎病人與胰腺癌的發(fā)病存在一定關(guān)系，發(fā)現(xiàn)慢性胰腺炎病人發(fā)生胰腺癌的比例明顯增高；另外還有許多因素與此 病的發(fā)生有一定關(guān)系，如職業(yè)、環(huán)境、地理等。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，大部分癌癥的生存率都在提高，例如乳腺癌，結(jié)直腸癌等腫瘤，近幾十年來(lái)，生存率得到 了大幅度的提升。但胰腺癌的生存率一直停滯不前，缺乏有效的治療方法，的死亡率使其，近年來(lái)胰腺癌微環(huán)境的研究引起了諸多學(xué)者的重視。胰腺癌微環(huán)境構(gòu)成復(fù)雜，其中，胰腺星狀細(xì)胞是胰腺癌微環(huán)境中重要的間質(zhì)細(xì)胞之一，在胰腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)、遷移、侵襲、血管生成、免疫逃逸、轉(zhuǎn)移及化療耐藥中發(fā)揮重要的作用。因此針對(duì)胰腺星狀細(xì)胞和胰腺癌細(xì)胞相互作用的研究有望提高胰腺癌患者的預(yù)后。胰腺星狀細(xì)胞(pancreaticstellate cells , PSC)是一種胰腺特異性間質(zhì)細(xì)胞，多在胰腺組織內(nèi)血管和導(dǎo)管周?chē)奂?，環(huán)繞在腺泡的基底部位，正常靜比狀態(tài)下只占胰腺細(xì)胞的4%左右，細(xì)胞質(zhì)中含有豐富的脂滴，以表達(dá)膠質(zhì)纖絲酸性蛋白質(zhì)(glial filament acidic protein , GFAP )、結(jié)合蛋白(Desmin)為特征。在胰腺組織損傷、應(yīng)激等條件下PSC被激活，成為一種肌成纖維細(xì)胞，胞質(zhì)中富含的脂滴消失，以表達(dá)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-smooth muscle actin , α-SMA)為標(biāo)志，能大量合成細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix , ECM)和分泌多種細(xì)胞因子。胰腺癌微環(huán)境中存在大量激活的PSC，在胰腺癌的發(fā)生發(fā)展中起著重要作用。PSC通過(guò)誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞(pancreatic cancercells , PCC)上皮一間質(zhì)轉(zhuǎn)變(epithelial-mesenchymaltransition , EMT)促進(jìn)胰腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移侵襲和轉(zhuǎn)移是腫瘤細(xì)胞脫離原發(fā)腫瘤灶到達(dá)靶器官的一個(gè)多步驟過(guò)程，眾多研究表明EMT與胰腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。EMT主要的特征是上皮細(xì)胞特征丟失同時(shí)伴間質(zhì)細(xì)胞特征獲得，如E一鈣茹蛋白(E-cadherin)表達(dá)下降，波形蛋白(Vimentin)表達(dá)上調(diào)。karnevi等研究發(fā)現(xiàn)，PSC與PCC共培養(yǎng)后能夠誘導(dǎo)PCC上皮性細(xì)胞標(biāo)志(E-cadherin , β-catenin)丟失，促進(jìn)間質(zhì)性細(xì)胞標(biāo)志(Vimentin,Snai-1）獲得，表明PSC在PCC的EMT形成過(guò)程中發(fā)揮了重要的作用。PSC參與胰腺癌進(jìn)展的各個(gè)環(huán)節(jié)，而PSC活化是PSC發(fā)揮功能的重要部分。因此，如能抑制PSC活化或控制PSC細(xì)胞功能將為胰腺癌綜合治療提供潛在的治療策略。因此，隨著針對(duì)抑制PSC活化或其功能的研究的深入，有望從胰腺癌微環(huán)境角度切實(shí)提高胰腺癌的綜合治療效果。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的人胰腺癌組織源星狀采用膠原酶消化法結(jié)合密度梯度離心法制備而來(lái)制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的人胰腺癌組織源星狀經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件：

培養(yǎng)基：含FBS、EGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

人胰腺癌組織源星狀體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠熱休克蛋白β2(HSPβ2)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： HSPβ2 ELISA Kit

Mouse vascular endothelial cell growth factor receptor 2 (VEGFR-2) ELISA Kit 小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體2(VEGFR-2)檢測(cè)試劑盒

RatTissuefactorpathwayinhibitor,TFPIELISAKit 大鼠組織因子途徑抑制物(TFPI)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforGSTs(HumanglathioneS-ansferases)ELISAKit人S轉(zhuǎn)移酶

細(xì)胞超氧化物陰離子比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

Rattumornecrosisfactor-relatedapoptosis-inducingligand3,AILR3ELISAKit大鼠腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體3(AIL-R3)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

PTN重組人 Pleiotrophin / PTN / HB-GAM 蛋白 Protein

Tanis/SELS (Selenoprotein S 0.5mgTanis/SELS (Selenoprotein S)又稱SELS 癥負(fù)調(diào)控因子蛋白(抗原)

SERPINI1重組人 SerpinI1 / Neuroserpin 蛋白 Protein

CLEC2B Protein Human 重組人 CLEC2B / CLECSF2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

TNFRSF10B Protein Human 重組人 TRAIL R2 / CD262 / TNFRSF10B 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

Tanis/SELS (Selenoprotein S 0.5mgTanis/SELS (Selenoprotein S)又稱SELS 癥負(fù)調(diào)控因子蛋白(抗原)

CLEC2B Protein Human 重組人 CLEC2B / CLECSF2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

PTN重組人 Pleiotrophin / PTN / HB-GAM 蛋白 Protein

TNFRSF10B Protein Human 重組人 TRAIL R2 / CD262 / TNFRSF10B 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽)

SERPINI1重組人 SerpinI1 / Neuroserpin 蛋白 Protein

小鼠水通道蛋白3(AQP-3)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human helical peptide (Helical Peptide) ELISA Kit 人螺旋肽(Helical Peptide)檢測(cè)試劑盒

Humanhydroxylysine,HylELISAKit 人羥賴(Hyl)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

DuckImmunoglobulinE,IgE檢測(cè)試劑盒鴨免疫球蛋白E(IgE)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細(xì)胞組蛋白H3-K9甲基化熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次

MousedipeptidylpeptldaseⅣ,DPPⅣELISAKit小鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人胰腺癌組織源星狀細(xì)胞小鼠生長(zhǎng)激素釋放多肽(GHRP)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠生長(zhǎng)激素（GH）檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌基因β/黑素瘤生激因子(GROβ/CXCL2/MGSA)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

小鼠損傷分子1(Kim-1)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。