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細胞簡介：

人NK分離自人外周血單個核細胞；NK細胞即自然殺傷細胞（natural killer cell，NK）是機體重要的免疫細胞，不僅與抗腫瘤、 抗病毒感染和免疫調(diào)節(jié)有關(guān)，而且在某些情況下參與超敏反應和自身免疫性疾病的發(fā)生，能夠識別靶細胞、殺傷介質(zhì)。NK細胞來源于骨髓淋巴樣干細胞，其分化、發(fā)育依賴于骨髓及微環(huán)境，主要分布于骨髓、外周血、肝、脾、肺和淋巴結(jié)。NK細胞不同于T、B細胞，是一類無需預先致敏就能非特異性殺傷腫瘤細胞和病毒感染細胞的淋巴細胞。由于NK細胞的殺傷活性無MHC限制，不依賴抗體，因此稱為自然殺傷活性。NK細胞胞漿豐富，含有較大的嗜天青顆粒，顆粒的含量與NK細胞的殺傷活性呈正相關(guān)。NK細胞作用于靶細胞后殺傷作用出現(xiàn)早，在體外1小時、體內(nèi)4小時即可見到殺傷效應。NK細胞的靶細胞主要有某些腫瘤細胞（包括部分細胞系）、病毒感染細胞、某些自身組織細胞（如血細胞）、寄生蟲等，因此NK細胞是機體抗腫瘤、抗感染的重要免疫因素，也參與第Ⅱ型超敏反應和移植物抗宿主反應。

方法簡介：

公司實驗室分離的人外周血NK采用取外周血、通過密度梯度離心、差速貼壁、細胞因子誘導法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的人源NK經(jīng)CD56免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含IL-2、IL-15、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 懸浮

細胞形態(tài) 短梭形

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠基轉(zhuǎn)移酶(ALT)檢測試劑盒 ，英文名： ALT ELISA Kit

Mouse alpha glathione S ansferase (-GST) ELISA Kit 小鼠αS轉(zhuǎn)移酶(α-GST)檢測試劑盒

ELISA 小鼠促卵泡素(mouse FSH)  進口分裝

CLIAKitfom-1(MouseKidneyinjurymolecule1)ELISAKIT小鼠腎損傷分子1

通用型蛋白電泳考馬斯亮藍染色試劑盒10次

ELISAKitTGF-α大鼠轉(zhuǎn)化生長因子α

PRDX5重組小鼠 Peroxiredoxin 5 / PRDX5 蛋白 Protein

V-Rel網(wǎng)狀內(nèi)皮增生病毒癌基因同源物A(RELA)重組蛋白 Recombinant V-Rel Reticuloendotheliosis Viral Oncogene Homolog A (RELA)

RAMP3重組人 RAMP3 蛋白 (Fc 標簽) Protein

HSPD1 Protein Human 重組人 HSPD1 / HSP60 蛋白 (His & GST 標簽)

BTLA Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 BTLA 蛋白 (Fc 標簽)

干擾素α4(IFNα4)重組蛋白 Recombinant Interferon Alpha 4 (IFNa4)

HSPD1 Protein Human 重組人 HSPD1 / HSP60 蛋白 (His & GST 標簽)

SMAD5重組小鼠 Smad5 蛋白 (His & GST 標簽) Protein

FCGR3 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD16 / FCGR3 蛋白 (His & AVI 標簽), Biotinylated

GPD1重組人 GPD1 / Glycerolphosphate Dehydrogenase 1 蛋白 Protein

小鼠CD8分子(CD8)檢測試劑盒 96T/48T

Rat pepsin (Pepsin) ELISA Kit 大鼠(Pepsin)檢測試劑盒

Humancatecholamine,CAELISAKit 人兒茶酚胺(CA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanCompleme1q,C1q檢測試劑盒人補體1q(C1q)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織a-(a-AMYLASE)活性CNPG3比色法定量檢測試劑盒20次

Humanpunjecellaoaibody,PCA-1/YoELISAKit人抗浦肯野細胞抗體/抗Yo抗體(PCA-1/Yo)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

人源NK細胞兔骨橋素(OPN)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔鉤端IgG(Lebtospira)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔兒茶酚胺(CA)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔超敏C反應蛋白(hs-CRP)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。