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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

人主動脈平滑肌分離自主動脈組織；主動脈是體循環(huán)的動脈主干。其運行路徑為：升主動脈起于左心室，至右側(cè)第2胸肋關(guān)節(jié)高度移行為主動脈弓，弓行向左后至第4胸椎體下緣移行為降主動脈；在第12胸椎體高度穿膈的主動脈裂孔移行為腹主動脈，以上為胸主動脈，至第4腰椎體下緣分為左、右髂總動脈；髂總動脈在骶髂關(guān)節(jié)高度分為髂內(nèi)、外動脈。主動脈平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀；密度高時，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點。主動脈平滑肌細胞在心血管疾病發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用，以主動脈平滑肌細胞為實驗研究對象，探討心血管疾病相關(guān)發(fā)病機制是目前研究的熱點；體外培養(yǎng)的主動脈平滑肌細胞對于研究其生理功能、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

方法簡介：

公司實驗室分離的人主動脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的人主動脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

兔子凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)ELISA 試劑盒

Human vasoactive iestinal peptide (VIP) ELISA Kit 人血管活性腸肽(VIP)檢測試劑盒

Humanai-teichoicacidaibody,TAELISAKit 人抗0壁酸抗體(TA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

Humanepidermalkeratin,EK檢測試劑盒人表皮角蛋白(EK)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織PRAK激酶活性定量檢測試劑盒(A/B/C)20次

HumanPancreastatinELISAKit人胰抑制素(Pancreastatin)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

ADAM15重組人 ADAM15 / MDC15 蛋白 Protein

嗅素4(OLFM4)重組蛋白 Recombinant Olfactomedin 4 (OLFM4)

HA重組甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

IL22RA2 Protein Human 重組人 IL22BP / IL22RA2 蛋白

Spike Protein MERS-CoV 中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein fragment (aa 383-502, Fc 標(biāo)簽)

嗅素4(OLFM4)重組蛋白 Recombinant Olfactomedin 4 (OLFM4)

IL22RA2 Protein Human 重組人 IL22BP / IL22RA2 蛋白

ADAM15重組人 ADAM15 / MDC15 蛋白 Protein

Spike Protein MERS-CoV 中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein fragment (aa 383-502, Fc 標(biāo)簽)

HA重組甲型流感 H5N1 (A/VietNam/1203/2004) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

豚鼠鉤端IgG(Leptospira)檢測試劑盒 ，英文名： Leptospira ELISA Kit

Human toxic shock syndrome toxin 1 iegrated (TSST-1) ELISA Kit 人毒性休克綜合征毒素1(TSST-1)檢測試劑盒

RabbitMacrophageInflammatoryProtein-1α,MIP-1αELISAkit 兔子巨噬細胞性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforbFGFELISAKit大鼠堿性成纖維生長因子

細菌色肉湯500毫升

RabbitIerleukin1,IL-1ELISAKit兔子白介素1(IL-1)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

人主動脈平滑肌細胞人狀瘤病毒抗體IgG(HPV-IgG)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人狀瘤病毒抗體(HPV)檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人瘤病毒58（HPV-58）檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

人瘤病毒18（HPV-18）檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝