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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

兔腦膜分離自腦膜組織；腦膜是顱骨與腦間的隔膜，一共有三層，由外向內(nèi)為硬腦膜、蛛網(wǎng)膜和軟腦膜。硬腦膜，是一厚而堅韌的雙層膜，外層是顱骨內(nèi)面的骨膜，僅疏松地附于顱蓋，特別是在枕部與顳部附著更疏松，稱為骨膜層。蛛網(wǎng)膜是一層半透明的膜，位于硬腦膜深部，其間有潛在性腔隙為硬腦膜下隙。軟腦膜是緊貼于腦表面的一層透明薄膜，并伸入溝裂。在腦室壁的某些部位，軟腦膜及其血管與室管膜上皮共同形成脈絡組織。脈絡組織中的血管反復分支成叢，突入腦室形成脈絡叢。腦膜細胞圍繞著大腦，參與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的正常發(fā)育，能穩(wěn)定腦軟膜表面的細胞外基質(zhì)、組織放射狀膠質(zhì)細胞網(wǎng)絡和小腦皮層分層結(jié)構(gòu)。

方法簡介：

實驗室分離的兔腦膜成纖維采用混合膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

實驗室分離的兔腦膜成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳3代左右；1-2代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔腦膜成纖維體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠乳酸脫氫酶A(LDHA)檢測試劑盒 ，英文名： LDHA ELISA Kit

Mouse angiotensin I (Ang- I) ELISA Kit 小鼠血管緊張素Ⅰ(Ang-Ⅰ)檢測試劑盒

RatChorionicGonadoophinβ,β-CGELISAKit 大鼠絨毛膜β(β-CG)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGzms-B(HumangranzymesB)ELISAKit人顆粒酶B

細胞同酸激酶(PK)總活性比色法定量檢測試劑盒20次

RatUrokinase-typePlasminogenActivatorReceptor,PLAUR/uPARELISAKit大鼠型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

DLL4重組小鼠 DLL4 / Delta4 蛋白 Protein

CC16(Clara cell protein 16 0.5mgCC16(Clara cell protein 16) peptide 克拉拉細胞蛋白(Clara細胞分泌蛋白)抗原

NGFR重組人 NGFR/ P75 蛋白 Protein

HK3 Protein Human 重組人 Hexokinase-3 / HK3 蛋白 (His & GST 標簽)

IL17RA Protein Rat 重組大鼠 IL17RA / IL17R 蛋白 (Fc 標簽)

CC16(Clara cell protein 16 0.5mgCC16(Clara cell protein 16) peptide 克拉拉細胞蛋白(Clara細胞分泌蛋白)抗原

HK3 Protein Human 重組人 Hexokinase-3 / HK3 蛋白 (His & GST 標簽)

DLL4重組小鼠 DLL4 / Delta4 蛋白 Protein

IL17RA Protein Rat 重組大鼠 IL17RA / IL17R 蛋白 (Fc 標簽)

NGFR重組人 NGFR/ P75 蛋白 Protein

小鼠NOD樣受體-2(NOD-2)檢測試劑盒 96T/48T

Rat hyaluronic acid (HA) ELISA Kit 大鼠透明質(zhì)酸(HA)檢測試劑盒

HumanCoisolELISAKit 人(Coisol)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

HumanCollagenaoaibody,CLA檢測試劑盒人抗膠原蛋白抗體(CLA)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織3-羥-3-甲戊二酰(HMG-COA)還原酶比色法定量檢測試劑盒20次

Humaecombinationactivatinggene2,RAG-2ELISAKit人重組激活基因2(RAG-2)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔腦膜成纖維細胞兔內(nèi)皮素-1(rabbit ET-1)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

兔降解產(chǎn)物(rabbit FDP)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

兔促卵泡素(rabbit FSH)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

兔堿性成纖維生長因子(rabbit b-FGF/FGF-2)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝