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細(xì)胞簡(jiǎn)介：

兔髂動(dòng)脈內(nèi)皮分離自髂動(dòng)脈組織；髂總動(dòng)脈位于機(jī)體的盆腔，兔的髂總動(dòng)脈有兩條，也就是臨床上左右兩條分支，它是由腹部主要的動(dòng)脈演化而來(lái)，由腹部的腹主動(dòng)脈沿著機(jī)體的脊柱方向向下進(jìn)行，到達(dá)第4腰椎后開(kāi)始分成兩支，這就是左右髂總動(dòng)脈。動(dòng)脈是介于心室與毛細(xì)血管之間的管道，它接近心室的部分，管徑大，管壁較厚。經(jīng)過(guò)反復(fù)分支，管徑逐漸變小，管壁變薄，后形成與毛細(xì)血管構(gòu)造相似的毛細(xì)血管前小動(dòng)脈，與毛細(xì)血管相接。動(dòng)脈的管徑大小和管壁的厚薄，雖相差很大，但構(gòu)造上均有共同之處。一般均由3層膜組成，內(nèi)層稱(chēng)為內(nèi)膜，由內(nèi)皮及縱行排列的結(jié)締組織構(gòu)成；中間的一層稱(chēng)為中膜，由環(huán)形排列的組織構(gòu)成；外的一層叫外膜，由縱行排列的結(jié)締組織構(gòu)成。動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞是覆蓋在主動(dòng)脈內(nèi)面的單層細(xì)胞，可分泌一系列血管活性物質(zhì)而保持血管穩(wěn)態(tài)，當(dāng)其受到炎癥或其它因素刺激后穩(wěn)態(tài)被破壞而導(dǎo)致一些心血管疾病的發(fā)生。因此，動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞已成為研究心血管疾病發(fā)病機(jī)制及治療藥物的工具。內(nèi)皮細(xì)胞或血管內(nèi)皮是一薄層的專(zhuān)門(mén)上皮細(xì)胞，由一層扁平細(xì)胞所組成。它形成血管的內(nèi)壁，是血管管腔內(nèi)血液及其他血管壁（單層鱗狀上皮）的接口。內(nèi)皮細(xì)胞是沿著整個(gè)循環(huán)系統(tǒng)，由心臟直至小的微血管。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔髂動(dòng)脈內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的兔髂動(dòng)脈內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

兔髂動(dòng)脈內(nèi)皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀(guān)察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠補(bǔ)體蛋白3(C3)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： C3 ELISA Kit

Mouse alpha 1 microglobulin (alpha 1-MG) ELISA Kit 小鼠α1微球蛋白(α1-MG)檢測(cè)試劑盒

ELISA 小鼠噬酸性粒細(xì)胞趨化因子(mouse Eotaxin)  進(jìn)口分裝

CLIAKitforKLR(Humankillercelllectin-likereceptor)ELISAKit人殺傷細(xì)胞凝集素樣受體

通用型半胱(cysteine)含量高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒20次

ELISAKitTPA大鼠組織多肽抗原

CPE重組人 Carboxypeptidase E / CPE 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

內(nèi)皮素1(EDN1)重組蛋白 Recombinant Endothelin 1 (EDN1)

CCL18重組人 CCL18 / PARC / MIP4 蛋白 Protein

HYOU1 Protein Human 重組人 ORP150 / HYOU1 / HSP12A 蛋白

NP Protein H7N9 重組甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) Nucleocapsid / NP

內(nèi)皮素1(EDN1)重組蛋白 Recombinant Endothelin 1 (EDN1)

HYOU1 Protein Human 重組人 ORP150 / HYOU1 / HSP12A 蛋白

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小鼠apelin 12(AP12)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat iercellular adhesion molecule 3 (ICAM-3/CD50) ELISA Kit 大鼠細(xì)胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)檢測(cè)試劑盒

HumanParathyroidHormone-LikeRelatedProtein,PTHrPELISAKit 人甲狀旁腺激素相關(guān)蛋白(PTHrP)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humancomplemeconolprotein,CCP檢測(cè)試劑盒人補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白(CCP)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織B-RAF激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

Humanpulmonaryactivatioegulatedchemokine,PARCELISAKit人肺部活化調(diào)節(jié)趨化因子(PARC/CCL18)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔髂動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞兔補(bǔ)體蛋白3檢測(cè)試劑盒   兔補(bǔ)體蛋白3試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔補(bǔ)體蛋白3試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔補(bǔ)體蛋白3試劑盒、兔補(bǔ)體蛋白3 檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

兔半胱酸蛋白酶抑制劑檢測(cè)試劑盒   兔半胱酸蛋白酶抑制劑試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔半胱酸蛋白酶抑制劑試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔半胱酸蛋白酶抑制劑試劑盒、兔半胱酸蛋白酶抑制劑檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

兔白細(xì)胞介素35檢測(cè)試劑盒   兔白細(xì)胞介素35試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔白細(xì)胞介素35試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔白細(xì)胞介素35試劑盒、兔白細(xì)胞介素35 檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

兔白細(xì)胞介素1檢測(cè)試劑盒   兔白細(xì)胞介素1試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔白細(xì)胞介素1試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：檢測(cè)試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔白細(xì)胞介素1試劑盒、兔白細(xì)胞介素1檢測(cè)試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀(guān)察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶(hù)自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀(guān)察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶(hù)用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪(fǎng)直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。