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細胞簡介：

小鼠肺微血管內皮分離自肺組織；肺是機體的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆蓋于心之上。肺有分葉，左二右三，共五葉。肺經肺系（指氣管、支氣管等）與喉、鼻相連，故稱喉為肺之門戶，鼻為肺之外竅。微血管內皮細胞密切參與包括再生、發(fā)育、傷口愈合等一系列生理及炎癥反應。細胞呈梭形或多角形，形成單層后呈鵝卵石樣或鋪路石樣排列。肺微血管內皮細胞構成半選擇性屏障，該屏障對于肺氣體交換，調節(jié)液體和可溶物在血液與肺間質之間的流動具有重要意義。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠肺微血管內皮采用組織貼塊法并結合內皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測

公司實驗室分離的小鼠肺微血管內皮經CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 內皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產品：

豬白介素2(IL-2)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬白介素1β(IL-1β)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬白介素1α(IL-1α)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

豬肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)ELISA 試劑盒

Human a disiegrin and metalloproteinase 8 (ADAM8) ELISA Kit 人解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)試劑盒

Porcineniicoxide,NOELISAKit 豬血清(NO)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforAlpha2-PI(HumanAlpha2-plasmininhititor)ELISAKit人α2纖溶酶抑制物

血液酪酶(tyrosinase)活性比色法定量試劑盒20次

NudeMouseClaracellprotein,CC16ELISAKit裸鼠克拉拉細胞蛋白(CC16)試劑盒

HA重組甲型流感 H11N9 (A/mallard/Alberta/294/1977) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標簽) Protein

ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin 0.1mgShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Dap22) ?？窠浂舅?span>(35肽)

S100A9重組人 S100A9 / CAGB / P14 蛋白 Protein

AMTN Protein Human 重組人 AMTN / Amelotin 蛋白

LXN Protein Human 重組人 Latexin / LXN / TCI 蛋白

ShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin 0.1mgShK(Stichodactyla helianthus Neurotoxin)-(Dap22) ?？窠浂舅?span>(35肽)

AMTN Protein Human 重組人 AMTN / Amelotin 蛋白

HA重組甲型流感 H11N9 (A/mallard/Alberta/294/1977) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標簽) Protein

LXN Protein Human 重組人 Latexin / LXN / TCI 蛋白

S100A9重組人 S100A9 / CAGB / P14 蛋白 Protein

小鼠肺微血管內皮細胞大鼠過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活因子1α(PPARγC1α)試劑盒 ，英文名： PPARγC1α ELISA Kit

Rat 6 keto prostaglandin F1a (6-keto-PGF1a) ELISA Kit 大鼠6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)試劑盒

RatAi-glucoprotein210,GP210ELISAKit 大鼠抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforeNOSELISAKit大鼠內皮型合成酶

細胞氯乙?；D移酶(CAT)報告基因活性同位素薄層色譜(TLC)試劑盒20次

RatLeptospiraIgG,LepIgGELISAKit大鼠鉤端IgG(LepIgG)試劑盒

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發(fā)生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現問題，責任由客戶自行承擔。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。