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實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSC）分離自骨髓；骨髓是機(jī)體的造血組織，位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動(dòng)物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細(xì)胞、血小板和各種白細(xì)胞。血小板有止血作用，白細(xì)胞能殺滅與抑制各種病原體，包括細(xì)菌、病毒等；某些淋巴細(xì)胞能制造抗體。因此，骨髓不但是造血器官，它還是重要的免疫器官。骨髓是存在于長(zhǎng)骨（如肱骨、股骨）的骨髓腔和扁平骨（如髂骨）的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中，是一種海綿狀的組織，能產(chǎn)生血細(xì)胞的骨髓略呈紅色，稱為紅骨髓。出生時(shí)，紅骨髓充滿全身骨髓腔，隨著年齡增大，脂肪細(xì)胞增多，相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代，后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。骨髓基質(zhì)系統(tǒng)內(nèi)存在的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是一種除造血干細(xì)胞以外的、具有高度自我更新能力和多向分化潛能的干細(xì)胞，可以向骨、軟骨、肌組織、皮膚、脂肪、神經(jīng)等多種組織分化，因此可以作為組織工程中的種子細(xì)胞。在骨髓中，BMSC占骨髓有核細(xì)胞總數(shù)的0.001%-0.1%，含量極低。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)條件要求較高，在培養(yǎng)過(guò)程中，受貼壁時(shí)間、種植密度、血清含量、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)基pH值等條件的影響。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠骨髓間充質(zhì)干采用沖洗骨髓、密度梯度離心、差速貼壁法結(jié)合培養(yǎng)基篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠骨髓間充質(zhì)干經(jīng)CD29、CD44免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問(wèn)題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問(wèn)題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠脂聯(lián)素受體1(ADIPOR1)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： ADIPOR1 ELISA Kit

Mouse soluble endothelial protein C receptor (sEPCR) ELISA Kit 小鼠可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)檢測(cè)試劑盒

Mouseglucoprotein130,gp130ELISAKIT 小鼠糖蛋白130(gp130)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanhistoneH2A-H2B-DNAaoaibodyELISAKit人抗組蛋白(H2A-H2B)-DNA抗體/抗二聚體-DNA抗體

B3高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒20次

ELISAKitCollagenaseI大鼠膠原酶I

NTRK3重組小鼠 TrkC / NTRK3 蛋白 Protein

CD177/NB1 peptide 嗜中性粒細(xì)胞抗原CD177抗原 0.5mgCD177/NB1 peptide 嗜中性粒細(xì)胞抗原CD177抗原

AK1重組人 AK1 / Adenylate kinase 1 蛋白 Protein

CSF3R Protein Human 重組人 G-CSFR / CD114 蛋白

CD274 Protein Rat 重組大鼠 PD-L1 / B7-H1 / CD274 蛋白

CD177/NB1 peptide 嗜中性粒細(xì)胞抗原CD177抗原 0.5mgCD177/NB1 peptide 嗜中性粒細(xì)胞抗原CD177抗原

CSF3R Protein Human 重組人 G-CSFR / CD114 蛋白

NTRK3重組小鼠 TrkC / NTRK3 蛋白 Protein

CD274 Protein Rat 重組大鼠 PD-L1 / B7-H1 / CD274 蛋白

AK1重組人 AK1 / Adenylate kinase 1 蛋白 Protein

小鼠牛血清白蛋白(BSA)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat methylase ELISA Kit (Methylase) 大鼠甲基化酶(Methylase)檢測(cè)試劑盒

Humandynamin2,DNM2ELISAKit 人發(fā)動(dòng)蛋白2(DNM2)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Human11-dehydro-thromboxaneB2,11-DH-TXB2檢測(cè)試劑盒人11去氫血栓烷B2(11-DH-TXB2)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母細(xì)胞線粒體分離(活性)試劑盒10次

MouseAquaporin4,AQP-4ELISAKit小鼠水通道蛋白4(AQP-4)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞小鼠可溶性細(xì)胞間粘附分子-1   英文名稱：   Soluble Iercellular Adhesion Molecule-1   規(guī)格：      英文縮寫(xiě)：   sICAM-1

小鼠干擾素-α   英文名稱：   Ierferon α   規(guī)格：      英文縮寫(xiě)：   IFN-α

小鼠干擾素-β   英文名稱：   Ierferon β   規(guī)格：      英文縮寫(xiě)：   IFN-β

小鼠干擾素-γ   英文名稱：   Ierferon γ   規(guī)格：      英文縮寫(xiě)：   IFN-γ