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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：小鼠頜下腺上皮細(xì)胞

英文名稱：Mouse Submandibular Gland Epithelial Cells

組織來(lái)源：頜下腺組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

小鼠頜下腺上皮分離自頜下腺組織；頜下腺是下頜部的唾液腺，左右各一個(gè)。頜下腺屬于唾液腺的一種，主要的功能就是分泌唾液。機(jī)體共有三大唾液腺，包括腮腺、頜下腺及舌下腺。頜下腺位于下頜骨的下方，接近下頜骨彎曲角附近，所以也叫下頜下腺（下頜骨下方的唾液腺），左右各一，由舌下舌系帶兩側(cè)處伸出頜下腺排泄管，主要分泌黏液和漿液狀性質(zhì)的唾液。頜下腺上皮細(xì)胞是一種高度分化的上皮細(xì)胞，在體外難以長(zhǎng)期存活和保持分化狀態(tài)；頜下腺的主要病理變化有：①頜下腺炎；②頜下腺囊腫；③頜下腺腫；④頜下腺結(jié)石。

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠頜下腺上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過(guò)上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠頜下腺上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無(wú)用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細(xì)胞解離出來(lái)。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。

轉(zhuǎn)基因植物EPSPS基因核酸試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?span>)   48T

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轉(zhuǎn)基因植物Sad1基因核酸試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?span>)   48T

轉(zhuǎn)基因植物Sad1基因核酸試劑盒   48T

豬胰島素(INS)ELISA 試劑盒

Human activated protein C (APC) ELISA Kit 人活化蛋白C(APC)試劑盒

Rabbitansforminggrowthfactorβ2,TGFβ2ELISAKit 兔轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(TGFβ2)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAOAb(HumanAi-OvaryAibody,AOAb)ELISAKit人抗卵巢抗體

血栓溶解活力(THROMBOLYTIC)體外試劑盒20次

Porcineierleukin10,IL-10ELISAKit豬白介素10(IL-10)試劑盒

HA重組甲型流感 H7N9 (A/Hangzhou/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

phospho-GSK-3 Beta(pSer9 0.5mgphospho-GSK-3 Beta(pSer9) 0酸化葡萄糖合成激酶-3β抗原

PMP2重組人 PMP2 / FABP8 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

BOLA1 Protein Human 重組人 BOLA1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

CX3CL1 Protein Human 重組人 Fractalkine / CX3CL1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

phospho-GSK-3 Beta(pSer9 0.5mgphospho-GSK-3 Beta(pSer9) 0酸化葡萄糖合成激酶-3β抗原

BOLA1 Protein Human 重組人 BOLA1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

HA重組甲型流感 H7N9 (A/Hangzhou/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

CX3CL1 Protein Human 重組人 Fractalkine / CX3CL1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

PMP2重組人 PMP2 / FABP8 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

小鼠頜下腺上皮細(xì)胞大鼠骨保護(hù)素配體(OPGL)試劑盒 ，英文名： OPGL ELISA Kit

Rabbit ierleukin 1 soluble receptor I (IL-1sR I) ELISA Kit 兔子白介素1可溶性受體I (IL-1sR Ⅰ)試劑盒

水痘-帶狀皰疹病毒(VZV)核酸試劑盒(PCR-熒光探針?lè)?span>) 48T

CLIAKitforMIP-5ELISAKit大鼠巨噬細(xì)胞癥蛋白5

體液結(jié)構(gòu)型內(nèi)皮細(xì)胞合成酶(cNOS/NOS3/eNOS)活性熒光定量試劑盒20次

ELISAKitCD6犬白細(xì)胞分化抗原6

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

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