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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：小鼠角膜基質(zhì)細(xì)胞

英文名稱：Mouse Corneal Stromal Cells

組織來(lái)源：眼角膜組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

小鼠角膜基質(zhì)分離自眼角膜組織；角膜位于眼球前壁的一層透明膜，約占纖維膜的前1/6，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同，中央部薄。角膜有十分敏感的神經(jīng)末梢，如有外物接觸角膜，眼瞼便會(huì)不由自主地合上以保護(hù)眼睛。為了保持透明，角膜并沒有血管，透過外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣。角膜分為五層，由前向后依次為：上皮細(xì)胞層、前彈力層、基質(zhì)層、后彈力層、內(nèi)皮細(xì)胞層。角膜基質(zhì)層是角膜的主要組成部分，占據(jù)角膜厚度的90%，由角膜基質(zhì)細(xì)胞、膠原纖維和細(xì)胞外基質(zhì)構(gòu)成。角膜基質(zhì)層缺損的修復(fù)主要由角膜基質(zhì)細(xì)胞的增殖及分泌細(xì)胞外基質(zhì)完成。角膜基質(zhì)層具有結(jié)構(gòu)規(guī)整，透明度高的特點(diǎn)，正常情況下角膜基質(zhì)細(xì)胞分泌組成基質(zhì)層的成分，維持角膜的透明度，此細(xì)胞對(duì)于角膜損傷的修復(fù)具有重要意義。角膜基質(zhì)細(xì)胞，存在于角膜基質(zhì)層中，在正常情況下，處于靜止?fàn)顟B(tài)。但當(dāng)角膜損傷時(shí)，不同上皮來(lái)源的因子及環(huán)境信號(hào)，將影響角膜基質(zhì)細(xì)胞的應(yīng)答反應(yīng)，決定著角膜能否被修復(fù)。

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠角膜基質(zhì)采用膠原酶消化后組織貼塊法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠角膜基質(zhì)經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無(wú)用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開，使細(xì)胞解離出來(lái)。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。

乙酸銨 (醋酸銨)   100g

AmmoniumAcetate   500g

化銨   100g

AmmoniumChloride   500g

鴨子胱天蛋白酶8(Casp-8)ELISA 試劑盒

Human ai brain tissue aibody (ABAb) ELISA Kit 人抗腦組織抗體(ABAb)試劑盒

HumanmajorhistocompatibilitycomplexⅢ,MHCⅢ/HLA-ⅢELISAKit 人主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類(MHCⅢ/HLA-Ⅲ)試劑盒 進(jìn)口分裝

CLIAKitforAD(Humanamiodarone)ELISAKit人呋同

血液總?cè)樗岜壬ǘ吭噭┖?span>20次

Mouseprostatespecificaigen,PSAELISAKit小鼠前列腺特異性抗原(PSA)試劑盒

TNFRSF4重組人 TNFRSF4 / OX40 / CD134 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

鋅指同源框蛋白4(ZFHX4)重組蛋白 Recombinant Zinc Finger Homeobox Protein 4 (ZFHX4)

GFER重組人 GFER / ALR 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

CADM3 Protein Human 重組人 CADM3 / NECL1 / IGSF4B 蛋白 (His 標(biāo)簽)

HA Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 (A/California/04/2009) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標(biāo)簽)

鋅指同源框蛋白4(ZFHX4)重組蛋白 Recombinant Zinc Finger Homeobox Protein 4 (ZFHX4)

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小鼠角膜基質(zhì)細(xì)胞大鼠高鐵血紅蛋白(MHB)試劑盒 ，英文名： MHB ELISA Kit

Rabbit Compleme 4 (C4) ELISA Kit 兔子補(bǔ)體蛋白4(C4)試劑盒

痢疾桿菌(SH)核酸試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T

CLIAKitforMHCIII/AgBIII/H-1IIIELISAKit大鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類

體液內(nèi)毒素凝膠法定量試劑盒20次

ELISAKitGHRP牛生長(zhǎng)激素釋放多肽

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

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