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實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠卵巢上皮分離自卵巢組織；卵巢是雌性動(dòng)物的生殖器官，卵巢的功能是產(chǎn)生卵以及類固醇激素。卵巢的位置與睪丸相同，僅左側(cè)發(fā)育（右側(cè)已退化），呈葡萄狀，均為處于不同發(fā)育時(shí)期的卵泡，卵泡呈黃色，卵巢表面密布血管。卵巢的大小與年齡和產(chǎn)卵期有關(guān)。大多數(shù)脊椎動(dòng)物有兩個(gè)卵巢，但是部分魚類的兩個(gè)卵巢融合為單個(gè)結(jié)構(gòu)，而所有鳥類只有左側(cè)卵巢有機(jī)能。卵巢是位于子宮兩側(cè)的一對(duì)卵圓形的生殖器官，它的外表有一層上皮組織，其下方有薄層的結(jié)締組織。卵巢的內(nèi)部結(jié)構(gòu)可分為皮質(zhì)和髓質(zhì)。皮質(zhì)位于卵巢的周圍部分，主要由卵泡和結(jié)締組織構(gòu)成；髓質(zhì)位于中央，由疏松結(jié)締組織構(gòu)成，其中有許多血管、淋巴管和神經(jīng)。卵巢上皮細(xì)胞主要功能：①上皮細(xì)胞能分泌激素，刺激卵細(xì)胞分化成熟；②細(xì)胞能分泌炎癥介質(zhì)，參與炎癥反應(yīng)。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠卵巢上皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法，并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠卵巢上皮經(jīng)Cytokeratin-19免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠白介素11(IL-11)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： IL-11 ELISA Kit

Mouse compleme 1 inhibitor aibody (C1INH) ELISA Kit 小鼠補(bǔ)體1抑制物抗體(C1INH)檢測(cè)試劑盒

ELISA 小鼠瘦素受體(mouse Leptin receptor)  進(jìn)口分裝

CLIAKitforIL-27(humanIerleukin27)ELISAKit人白介素27

通用型精(arginine)含量高效液相色譜法定量檢測(cè)試劑盒20次

ELISAKitPDGF-AB大鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子AB

IL17F重組大鼠 IL17F / IL-17F 蛋白 Protein

Collagen III (Anti-Collagen Type III 0.5mgCollagen III (Anti-Collagen Type III ) 抗Ⅲ型膠原抗原(Collagen Ⅲ Ⅲ型膠原)

KDR重組人 VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 蛋白 Protein

FUT8 Protein Human 重組人 FUT8 蛋白 (aa 68-575, His 標(biāo)簽)

BST1 Protein Mouse 重組小鼠 CD157 / BST1 蛋白

Collagen III (Anti-Collagen Type III 0.5mgCollagen III (Anti-Collagen Type III ) 抗Ⅲ型膠原抗原(Collagen Ⅲ Ⅲ型膠原)

FUT8 Protein Human 重組人 FUT8 蛋白 (aa 68-575, His 標(biāo)簽)

IL17F重組大鼠 IL17F / IL-17F 蛋白 Protein

BST1 Protein Mouse 重組小鼠 CD157 / BST1 蛋白

KDR重組人 VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 蛋白 Protein

小鼠補(bǔ)體片段3b受體(C3bR)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat prostate specific aigen (PSA) ELISA Kit 大鼠前列腺特異性抗原(PSA)檢測(cè)試劑盒

HumanUrokinase-typePlasminogenActivatorReceptor,PLAUR/uPARELISAkit 人型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanBoneMorphogeneticProtein6,BMP-6檢測(cè)試劑盒人骨形成蛋白6(BMP-6)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物總糖蛋白樹脂法化試劑盒5次

HumanSeptokinase,SKELISAKit人鏈激酶(SK)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠卵巢上皮細(xì)胞兔子中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔子脂聯(lián)素(ADP)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔子脂蛋脂酶A2(Lp-PL-A2)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

兔子孕激素/孕(PROG)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝