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① 組織塊培養(yǎng)法

組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。

② 消化培養(yǎng)法

③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

④器官培養(yǎng)

器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。

產(chǎn)品名稱：小鼠胚成纖維細(xì)胞

英文名稱：Mouse Embryonic Fibroblast Cells

組織來(lái)源：胚胎

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

小鼠胚成纖維分離自胚胎；成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái)。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的胚胎成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開(kāi)始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長(zhǎng)，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng)，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。該細(xì)胞常用作ES細(xì)胞培養(yǎng)常用的飼養(yǎng)層細(xì)胞，能產(chǎn)生抑制ES細(xì)胞自主分化和促進(jìn)ES細(xì)胞增殖的因子，故能有效地促進(jìn)ES細(xì)胞的增殖并維持其未分化特性和多潛能性，且分泌效果優(yōu)于外源添加的一些因子，而且可以為ES細(xì)胞的培養(yǎng)提供類似于體內(nèi)的微環(huán)境，故在研究哺乳動(dòng)物ES細(xì)胞中得到廣泛使用。

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胚成纖維采用消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胚成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)基：含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

小鼠胚成纖維體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

取材→分離→培養(yǎng)和維持

1、取材

人和動(dòng)物細(xì)胞的取材是原代細(xì)胞培養(yǎng)成功的首要條件，直接影響細(xì)胞的體外培養(yǎng)。

(1) 取材的基本要求

① 取材要注意新鮮和保鮮

② 應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌

③ 防止機(jī)械損傷

④ 去除無(wú)用組織和避免干燥

⑤ 應(yīng)注意組織類型、分化程度、年齡等

⑥ 作好記錄

2、分離

人或動(dòng)物體內(nèi)(或胚胎組織)由于多種細(xì)胞結(jié)合緊密，不利于各個(gè)細(xì)胞在體外培養(yǎng)中生長(zhǎng)繁殖，必須將現(xiàn)有的組織塊充分散開(kāi)，使細(xì)胞解離出來(lái)。

(1)懸浮細(xì)胞的分離方法

組織材料若來(lái)自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料，的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細(xì)胞的比重不同可在分層液中形成不同層，這樣可根據(jù)需要收獲目的細(xì)胞。

(2)實(shí)體組織材料的分離方法

對(duì)于實(shí)體組織材料，由于細(xì)胞間結(jié)合緊密，為了使組織中的細(xì)胞充分分散，形成細(xì)胞懸液，可采用機(jī)械分散法(物理裂解)和消化分離法。

① 機(jī)械分散法

特點(diǎn):簡(jiǎn)便、快速,但對(duì)組織機(jī)械損傷大，而且細(xì)胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。

② 消化分離法

組織消化法是把組織剪切成較小團(tuán)塊(或糊狀)，應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學(xué)作用進(jìn)一步使細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，使團(tuán)塊膨松，由塊狀變成絮狀，此時(shí)再采用機(jī)械法，用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩，使細(xì)胞團(tuán)塊得以較充分的分散，制成少量細(xì)胞群團(tuán)和大量單個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞懸液，接種培養(yǎng)后，細(xì)胞容易貼壁生長(zhǎng)。

大鼠血小板反應(yīng)蛋白(THBS1)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： THBS1 ELISA Kit

Mouse coisol (Coisol) ELISA Kit 小鼠(Coisol)檢測(cè)試劑盒

MouseUrokinase-typePlasminogenActivatorReceptor,PLAUR/uPARELISAkit 小鼠型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanchemerinELISAKit人chemerin

細(xì)胞CHK2激酶活性定量檢測(cè)試劑盒(A/B/C)20次

ELISAKitsIgA大鼠分泌型免疫球蛋白A

CA4重組小鼠 Carbonic Anhydrase IV / Car4 蛋白 Protein

CCL12/MCP-5(C-C motif chemokine 12 0.5mgCCL12/MCP-5(C-C motif chemokine 12) 單核細(xì)胞趨化蛋白5抗原

UBE2M重組人 UBE2M 蛋白 Protein

FST Protein Human 重組人 Follistatin / FST (FS288) 蛋白

CD8A Protein Rat 重組大鼠 CD8A / Lyt2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

CCL12/MCP-5(C-C motif chemokine 12 0.5mgCCL12/MCP-5(C-C motif chemokine 12) 單核細(xì)胞趨化蛋白5抗原

FST Protein Human 重組人 Follistatin / FST (FS288) 蛋白

CA4重組小鼠 Carbonic Anhydrase IV / Car4 蛋白 Protein

CD8A Protein Rat 重組大鼠 CD8A / Lyt2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

UBE2M重組人 UBE2M 蛋白 Protein

小鼠穿孔素/成孔蛋白(PF/PFP)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat prostaglandin E1 (PGE1) ELISA Kit 大鼠前列腺素E1(PGE1)檢測(cè)試劑盒

Humancirculatingimmunecomplex,CICELISAKit 人循環(huán)免疫復(fù)合物(CIC)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanbeta-siteAPP-cleavingenzyme2,BACE2檢測(cè)試劑盒人β位淀粉樣前體蛋白裂解酶2(BACE2)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物總RNA化試劑盒(高多糖/酚)20次

HumanSurfactaProteinA，SP-AELISAKit人表面活性蛋白A(SP-A)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠胚成纖維細(xì)胞豚鼠白介素6(IL-6)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

豚鼠白介素4(IL-4)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

豚鼠白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

豚鼠白介素12(IL-12/P70)檢測(cè)試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近,公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作,凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

T-25培養(yǎng)瓶充滿培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸;收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài),如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作,如懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

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