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實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細胞簡介：

小鼠皮層神經(jīng)元分離自腦皮層組織；皮層神經(jīng)元細胞是構(gòu)成中樞神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能的基本單位。神經(jīng)元是具有長突觸(軸突)的細胞，它由細胞體和細胞突起構(gòu)成。在長的軸突上套有一層鞘，組成神經(jīng)纖維，它的末端的細小分支叫做神經(jīng)末梢。細胞體位于腦、脊髓和神經(jīng)節(jié)中，細胞突起可延伸至全身各器官和組織中。細胞體是細胞含核的部分，其形狀大小有很大差別，直徑約4-120微米。核大而圓，位于細胞中央，染色質(zhì)少，核仁明顯。細胞質(zhì)內(nèi)有斑塊狀的核外染色質(zhì)，還有許多神經(jīng)元纖維。細胞突起是由細胞體延伸出來的細長部分，又可分為樹突和軸突。每個神經(jīng)元可以有一或多個樹突，可以接受刺激并將興奮傳入細胞體。每個神經(jīng)元只有一個軸突，可以把興奮從胞體傳送到另一個神經(jīng)元或其他組織，如肌肉或腺體。皮質(zhì)神經(jīng)元是大腦皮質(zhì)的主要組成細胞之一，是大腦進行功能活動調(diào)節(jié)的基本單位，參與動物多種中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理過程。通過形態(tài)學(xué)觀察顯示神經(jīng)元從貼壁、伸出突起開始；突起逐漸增多，而后突起進一步增多并逐漸成網(wǎng)，同時細胞胞體增大，周邊光暈明顯。10-12d細胞為豐滿，隨后神經(jīng)元開始裂解，突起逐漸減少，細胞已退化變性，輪廓模糊，光暈消失，細胞變形。

方法簡介：

公司實驗室分離的小鼠皮層神經(jīng)元采用消化法、神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結(jié)合化學(xué)試劑抑制法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實驗室分離的小鼠皮層神經(jīng)元經(jīng)β-Tubulin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 神經(jīng)元細胞樣

傳代特性 屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關(guān)信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前3天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運輸?shù)脑?，個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

大鼠內(nèi)向整流型離子通道亞家族J成員5(KCNJ5)檢測試劑盒 ，英文名： KCNJ5 ELISA Kit

Mouse platelet derived growth factor AB (PDGF-AB) ELISA Kit 小鼠血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)檢測試劑盒

Ratai-alpha-FodrinIgG/IgA,α-FodrinIgG/IgAELISAKit 大鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-FodrinIgG/IgA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitforGL3(HumanGlucoseanspoer3)ELISAKit人葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白3

細胞分泌型堿性0酸酶化學(xué)發(fā)光法定量檢測試劑盒20次

RatStemcellfactor/mastcellgrowthfactor,SCF/MGFELISAKit大鼠干細胞因子/肥大細胞生長因子(SCF/MGF)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

CDH1重組大鼠 E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 蛋白 Protein

CTn1 (cardiac troponin 1 0.5mgCTn1 (cardiac troponin 1) 心肌肌鈣蛋白

XRCC5 & XRCC6重組人 XRCC5 & XRCC6 Heterodimer 蛋白 Protein

CXCL12 Protein Human 重組人 CXCL12 / SDF-1 蛋白

PLAUR Protein Mouse 重組小鼠 PLAUR / CD87 / uPAR 蛋白

CTn1 (cardiac troponin 1 0.5mgCTn1 (cardiac troponin 1) 心肌肌鈣蛋白

CXCL12 Protein Human 重組人 CXCL12 / SDF-1 蛋白

CDH1重組大鼠 E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 蛋白 Protein

PLAUR Protein Mouse 重組小鼠 PLAUR / CD87 / uPAR 蛋白

XRCC5 & XRCC6重組人 XRCC5 & XRCC6 Heterodimer 蛋白 Protein

小鼠瘤病毒16(HPV-16)檢測試劑盒 96T/48T

Human endothelial lipase (EL) ELISA Kit 人內(nèi)皮脂肪酶(EL)檢測試劑盒

Humansreumalbumin,HSAELISAKit 人血清白蛋白(HSA)檢測試劑盒 96T/48T 進口分裝

guineapigfollicle-stimulatinghormone,FSH檢測試劑盒豚鼠促卵泡素(FSH)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

真菌/酵母同還原酶(aldo-ketoreductase)總活性比色法定量檢測試劑盒20次

MouseCholecystokinin,CCKELISAKit小鼠膽囊收縮素/腸促肽(CCK)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠皮層神經(jīng)元細胞小鼠巨噬細胞來源的趨化因子(mouse MDC)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

小鼠髓過氧化物酶(mouse MPO)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

小鼠粘蛋白(mouse MUC5AC)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝

小鼠肌肉生成抑制素(mouse Myostatin)   作用：   ELISA   規(guī)格：      進口分裝