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實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠脂肪干分離自脂肪組織；脂肪組織主要由大量群集的脂肪細(xì)胞構(gòu)成，聚集成團(tuán)的脂肪細(xì)胞由薄層疏松結(jié)締組織分隔成小葉；貯存的脂肪，在需要時(shí)可迅速分解成甘油和脂肪酸，經(jīng)血液輸送到各組織以供利用。它們影響胰島素敏感性、血壓水平、內(nèi)皮功能、纖溶活動(dòng)及炎癥反應(yīng)，參與多種重要病理生理過程；脂肪組織已由過去單純作為能量?jī)?chǔ)存的器官而成為一個(gè)極其重要的內(nèi)分泌系統(tǒng)。脂肪干細(xì)胞（ADSCs）是一種具有多向分化潛能的干細(xì)胞，主要恢復(fù)組織細(xì)胞的修復(fù)功能，促進(jìn)細(xì)胞的再生，恢復(fù)年輕面容的同時(shí)，身體機(jī)能也得到充分改善，有效改善亞健康、早衰等疾病，由內(nèi)而外真正的有效抵抗衰老。脂肪干細(xì)胞具有很多優(yōu)點(diǎn)：①具有自我更新及多向分化的潛能；②來源充足；③對(duì)供區(qū)的創(chuàng)傷較??；④獲得率及體外擴(kuò)增速率高。脂肪干細(xì)胞是目前被廣泛應(yīng)用于組織工程領(lǐng)域中理想的種子細(xì)胞。

方法簡(jiǎn)介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠脂肪干采用膠原酶消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)

公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠脂肪干經(jīng)CD29、CD44免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

兔子血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

兔子血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

兔子血管緊張素1型受體（AT1）試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

兔子纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)試劑盒     試劑盒   組裝/原裝

小鼠基轉(zhuǎn)移酶(ALT)試劑盒

Human aspaate aminoansferase (AST) ELISA Kit 人天門冬氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)試劑盒

Humananapasticlymphomakinase,ALKELISAKit 人間變性淋巴瘤激酶(ALK)試劑盒 進(jìn)口分裝

HumanBrainderivedneuroophicfacor,BDNF試劑盒人腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)試劑盒

植物組織可溶性總核蛋白高制備試劑盒10次

Humansquamouscellcarcinomarelatedaigen,SCCAgELISAKit人鱗狀細(xì)胞癌相關(guān)抗原(SCCAg)試劑盒

HA重組甲型流感 H5N1 (A/Xinjiang/1/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

RGS2 peptide G蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子2抗原 0.5mgRGS2 peptide G蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子2抗原

REG3G重組人 REG3G / PAP1B 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

GABARAP Protein Human 重組人 GABARAP / Apg8p1 蛋白 (His & MBP 標(biāo)簽)

CSF3R Protein Human 重組人 G-CSFR / CD114 / CSF3R 蛋白

RGS2 peptide G蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子2抗原 0.5mgRGS2 peptide G蛋白信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)節(jié)因子2抗原

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HA重組甲型流感 H5N1 (A/Xinjiang/1/2006) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

CSF3R Protein Human 重組人 G-CSFR / CD114 / CSF3R 蛋白

REG3G重組人 REG3G / PAP1B 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

小鼠脂肪干細(xì)胞大鼠雌酮(E1)試劑盒 ，英文名： E1 ELISA Kit

Mouse collagen type II (Col II) ELISA Kit 小鼠Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)試劑盒

ELISA 小鼠細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4 (mouse CTLA-4)  進(jìn)口分裝

CLIAKitforLHELISAKit魚促黃體激素

通用型HHV6-B(HUMANHERPESVIRUS6-B)病毒定量PCR擴(kuò)增試劑盒20次

ELISAKitGFAP神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白