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產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱：Human TGF-β3 protein

產(chǎn)品中文名稱：重組人轉(zhuǎn)化生長因子-β3（TGF-β3）

規(guī)格：5 μg/20 μg/100 μg/1 mg

貨號：EY-01X8707
用途：僅供科研研究實(shí)驗

特點(diǎn)&優(yōu)勢:

標(biāo)簽:無標(biāo)簽

表達(dá)宿主:大腸桿菌

種屬:人

序列:氨基酸序列來源于人源：TGF-β3 蛋白（Ala301-Ser412）表達(dá)的蛋白片段，C-端帶有 6×His 標(biāo)記。

活性:以其抑制IL-4誘導(dǎo)的HT-2細(xì)胞增殖的能力來衡量。這種效應(yīng)的ED50<50 pg/mL。重組人 TGF beta 3 的特異性活性:大于 2 x 10? IU/mg。

蛋白長度：該蛋白質(zhì)的計算分子量為 13.66 kDa，在還原條件下，蛋白質(zhì)遷移為 13 kDa（SDS-PAGE 分析）。

純度:> 98 % ，使用SDS-PAGE動?動

背景

轉(zhuǎn)化生長因子-β3（TGF-beta 3）屬于 TGF-β 超家族，TGF-β3 與 TGF-β1 和 TGF-β2 的相似度分別為 86%、91%。TGF-beta 3 是一種 12.8 kDa 的蛋白質(zhì)，含有 412 個氨基酸，可抑制 DNA 合成，增加細(xì)胞增殖，是心臟形態(tài)發(fā)生過程中 EMT 的重要介質(zhì)，并在乳汁淤積時上調(diào)，在乳腺內(nèi)陷過程中誘導(dǎo)乳腺上皮細(xì)胞凋亡。

本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):

 1.操作簡便、快捷。可直接加入到檢測平板。在96-孔板中檢測時,無需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。

2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑來溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進(jìn)一步生成。

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體

1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。

(四)誘導(dǎo)表達(dá)

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實(shí)驗組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。

公司正在出售的產(chǎn)品：

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山羊骨形成蛋白2（BMP-2）檢測試劑盒         組裝/原裝

山羊孤啡肽（OFQ/N）檢測試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

大鼠白介素17(IL-17)檢測試劑盒 ，英文名： IL-17 ELISA Kit

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通用型基因甲基化檢測試劑盒20/50次

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重組人轉(zhuǎn)化生長因子-β3（TGF-β3）CD48重組小鼠 CD48 / SLAMF2 / BCM1 蛋白 Protein

Caspase-8 (pro Mch5 0.5mgCaspase-8 (pro Mch5) 半胱蛋白酶8抗原

ENTPD3重組人 ENTPD3 / NTPDase3 / CD39L3 蛋白 Protein

IL16 Protein Human 重組人 IL16 / Interleukin-16 蛋白

CDH13 Protein Rat 重組大鼠 CDH13 / Cadherin-13 / H Cadherin 蛋白