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產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱：Human GDF3 Protein

產(chǎn)品中文名稱：重組人生長分化因子 3（GDF3）

規(guī)格：5 μg/20 μg/100 μg/1 mg

貨號(hào)：EY-01X8708
用途：僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

特點(diǎn)&優(yōu)勢(shì):

標(biāo)簽:無標(biāo)簽

表達(dá)宿主:大腸桿菌

種屬:人

序列:氨基酸序列來源于：人源GDF 3(Q9NR23) (Ala251-Gly364)表達(dá)的蛋白片段。

蛋白長度：重組人 GDF 3 由 141 個(gè)氨基酸組成，預(yù)計(jì)分子質(zhì)量為 13 kDa。

純度:> 96 % ，使用SDS-PAGE檢測(cè)

采用 LAL 法檢測(cè)，每 1 μg 蛋白質(zhì)中的 EU 含量小于 1.0。

產(chǎn)品形式:凍干粉，凍干緩沖液為無菌的 150mM NaCl 20mM Tris , pH 8.0溶液。

基因ID:9573

使用中注意事項(xiàng):開蓋使用前，動(dòng)?動(dòng)

背景

GDF-3（以前稱為 Vgr-2）是一種 TGF-beta 超家族成員，屬于生長/分化因子家族。因子家族的成員。GDF-3 在未分化的胚胎干（ES）細(xì)胞、白色脂肪組織和大腦中表達(dá)。366氨基酸（aa）的小鼠 GDF-3 含有 22 aa 的信號(hào)序列:、230 aa 的前肽和 114 aa 的成熟蛋白。含有一個(gè)潛在的 N-糖基化位點(diǎn)。成熟區(qū)包含一個(gè)半胱結(jié)結(jié)構(gòu)，該結(jié)構(gòu)在整個(gè)的半胱結(jié)結(jié)構(gòu)。然而，它缺少負(fù)責(zé)形成分子間二硫鍵的第四個(gè)半胱，因此 GDF-3 可能存在一個(gè) N.鍵，因此 GDF-3 可能以非共價(jià)的同源二聚體形式存在。成熟的人類 GDF-3 與小鼠和大鼠的 GDF-3 有 83% 和 83% aa 的序列:相同性。小鼠和大鼠的 GDF-3 有 83%、83% aa 的序列:相同性。大部分 GDF-3 以未水解的前體形式存在。未加工的前體和成熟的前體似乎都有活性:，但活性:可能有所不同。所有形式都能對(duì)抗 BMPs。在 ES 細(xì)胞中，抑制 BMP2 信號(hào)傳導(dǎo)的GDF-3 可維持多能性。GDF-3 還影響早期細(xì)胞命運(yùn)的決定；例如，缺失小鼠 GDF-3會(huì)導(dǎo)致胃前期胚胎的前內(nèi)臟內(nèi)胚層出現(xiàn)缺陷。在胚胎發(fā)生過程中，GDF-3 與 GDF-1 相互合作。

本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):

 1.操作簡便、快捷?？芍苯蛹尤氲綑z測(cè)平板。在96-孔板中檢測(cè)時(shí),無需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。

2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑來溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進(jìn)一步生成。

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體

1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測(cè)序驗(yàn)證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。

(四)誘導(dǎo)表達(dá)

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對(duì)照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實(shí)驗(yàn)組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。

公司正在出售的產(chǎn)品：

cath-B/CB(Cathepsin B 0.5mgcath-B/CB(Cathepsin B) 組織蛋白酶B抗原

IGSF3 Protein Human 重組人 IGSF3 / EWI-3 蛋白

AXL重組小鼠 Axl Kinase 蛋白 Protein

SPN Protein Rat 重組大鼠 SPN / CD43 / Sialophorin 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

BCAM重組人 BCAM 蛋白 Protein

豚鼠血紅蛋白(HB)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： HB ELISA Kit

Human secretory compone (SC) ELISA Kit 人分泌成分(SC)檢測(cè)試劑盒

rabbittissueinhibitorsofmetalloproteinase1,TIMP-1ELISAKit 兔子基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子1(TIMP-1)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforBcl-2(HumanB-cellleukemia/lymphoma2)ELISAKit人B細(xì)胞淋巴瘤因子2

纖維蛋白溶酶原激活劑抑制物(PAI)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

RabbitComplemefragme3a,C3aELISAKit兔子補(bǔ)體片斷3a(C3a)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

嗜肺軍團(tuán)桿菌(LP)核酸檢測(cè)試劑盒   48T

綠膿桿菌(PA)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

綠膿桿菌(PA)核酸檢測(cè)試劑盒   48T

腸道病毒EV71核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)   48T

大鼠顆粒酶M(GZMM)檢測(cè)試劑盒 ，英文名： GZMM ELISA Kit

Monkey endotoxin (ET) ELISA Kit內(nèi)毒素(ET)檢測(cè)試劑盒

Ratmyeloperoxidase-aineuophilcytoplasmicaibodyIgG,MPO-ANCAIgGELISAkit 大鼠髓過氧化物酶特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCAIgG)檢測(cè)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforFSHPoulyELISAKitFSH禽類酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒

細(xì)胞環(huán)氧化酶(CYCLOOXYGENASE)總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

RatplateletmembraneglycoproteinⅡbⅢa,GP-ⅡbⅢaELISAKit大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)檢測(cè)試劑盒規(guī)格：96T/48T

重組人生長分化因子 3（GDF3）AXL重組小鼠 Axl Kinase 蛋白 Protein

cath-B/CB(Cathepsin B 0.5mgcath-B/CB(Cathepsin B) 組織蛋白酶B抗原

BCAM重組人 BCAM 蛋白 Protein

IGSF3 Protein Human 重組人 IGSF3 / EWI-3 蛋白

SPN Protein Rat 重組大鼠 SPN / CD43 / Sialophorin 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)