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細(xì)胞簡介：

人腎足突分離自腎組織；腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團(tuán)毛細(xì)血叢，被鮑氏囊所包裹，是尿液形成的重要構(gòu)造。血液經(jīng)由入球小動(dòng)脈進(jìn)入腎小球。腎小球內(nèi)的微血管不像其他微血管，匯流入靜脈，而是流入出球小動(dòng)脈。在腎小球內(nèi)，微血管受到高壓，而加速了超濾作用（hyperfiltration）的進(jìn)行。微血管中的血液經(jīng)由超濾作用之后，形成濾液，滲入鮑氏囊內(nèi)。腎小球與鮑氏囊合稱為腎小體，腎小球的過濾速率便稱為腎小球過濾率。足細(xì)胞（podocyte）即腎小囊臟層上皮細(xì)胞，它附著于腎小球基底膜（GBM）的外側(cè)，連同GBM和毛細(xì)血管內(nèi)皮一起構(gòu)成了腎小球血液濾過屏障。足細(xì)胞特殊的解剖位置，使得其體內(nèi)研究較為困難；又由于正常成年機(jī)體的腎臟足細(xì)胞是一種終末分化細(xì)胞，體外培養(yǎng)的原代細(xì)胞不能增殖。足細(xì)胞呈星型多突狀，胞體較大，由胞體伸出許多突起，又稱足突（FP），呈指狀交叉復(fù)蓋于GBM外表面，并通過黏附分子和蛋白多糖分子與GBM相連。足細(xì)胞在正常情況下可以分泌GBM的主要組成成分，IV型膠原和纖維連接蛋白（FN）；在促腎纖維化引資等刺激下還能分泌具有降解GBM作用的基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）和組織蛋白酶，從而在GBM的代謝平衡中發(fā)揮重要作用。足細(xì)胞之間鄰近的足突相互交替，形成了許多30-40nm的裂孔，孔上覆蓋一層厚4-6nm的裂孔隔膜，即腎小球足突間裂孔隔膜。后者是血漿蛋白通過脈管系統(tǒng)的后屏障，對于維持腎小球?yàn)V過屏障結(jié)構(gòu)與功能完整性發(fā)揮關(guān)鍵作用。

方法簡介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人腎足突采用機(jī)械研磨過不同孔徑不銹鋼網(wǎng)篩結(jié)合膠原酶消化法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人腎足突經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

公司正在出售的產(chǎn)品：

人異質(zhì)型核糖核蛋白復(fù)合物/抗RA33抗體(hNP/RA33)ELISA 試劑盒

Human ansfer factor (TF) ELISA Kit 人轉(zhuǎn)移因子(TF)檢測試劑盒

Humahymidylatesyhetase,TSELISAKit 人胸苷酸合成酶(TS)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

HumanIerleukin17,IL-17檢測試劑盒人白介素17(IL-17)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

組織可溶性總蛋白制備試劑盒20次

Humaniestinalfattyacidbindingprotein，iFABPELISAKit人腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

ACVR2A重組小鼠 ACVR2A / ActrIIa 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

Beta-Amyloid(1-28 0.5mgBeta-Amyloid(1-28) β淀粉樣肽1-28(多肽蛋白)

NRG1重組人 NRG1-alpha 蛋白 (EGF Domain, Fc 標(biāo)簽) Protein

ITGAX & ITGB2 Protein Human 重組人 ITGAX & ITGB2 Heterodimer 蛋白

FZD4 Protein Rat 重組大鼠 Frizzled-4 / FZD4 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

Beta-Amyloid(1-28 0.5mgBeta-Amyloid(1-28) β淀粉樣肽1-28(多肽蛋白)

ITGAX & ITGB2 Protein Human 重組人 ITGAX & ITGB2 Heterodimer 蛋白

ACVR2A重組小鼠 ACVR2A / ActrIIa 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein

FZD4 Protein Rat 重組大鼠 Frizzled-4 / FZD4 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

NRG1重組人 NRG1-alpha 蛋白 (EGF Domain, Fc 標(biāo)簽) Protein

豚鼠白介素18(IL-18)檢測試劑盒 ，英文名： IL-18 ELISA Kit

Human ubiquitin ligase (E3/UBPL) ELISA Kit 人泛素連接酶(E3/UBPL)檢測試劑盒

rabbitIerleukin8,IL-8ELISAKit 兔子白介素8(IL-8/CXCL8)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforBeta-CGELISAKit大鼠絨毛膜β

細(xì)菌乙醇脫氫酶總活性比色法定量檢測試劑盒20次

RabbitFibrinogen,FbgELISAKit兔血纖蛋白原(Fbg)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

人腎足突細(xì)胞人載脂蛋白E檢測試劑盒   人載脂蛋白E試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人載脂蛋白E試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人載脂蛋白E試劑盒、人載脂蛋白E 檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

人載脂蛋白C3檢測試劑盒   人載脂蛋白C3試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人載脂蛋白C3試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人載脂蛋白C3試劑盒、人載脂蛋白C3 檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

人載脂蛋白B100檢測試劑盒   人載脂蛋白B100試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人載脂蛋白B100試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人載脂蛋白B100試劑盒、人載脂蛋白B100 檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

人載脂蛋白A5檢測試劑盒   人載脂蛋白A5試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人載脂蛋白A5試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：檢測試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人載脂蛋白A5試劑盒、人載脂蛋白A5 檢測試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置4-6h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm離心3 min，棄上清。加5 mL PBS重懸細(xì)胞，再900 rpm-1000 rpm離心3 min，，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議1：2傳代 。

9.注意： 1:2傳代就是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)T25瓶或者2個(gè)6cm皿。不是1個(gè)T25瓶傳2個(gè)10cm皿。